[생물학 실험보고서] Flow cytometry를 이용한 면역세포의 분리 및 분석

소개

CD4, CD8, CD#, B220에 대한 항체로 형광 염색한 후 Flow cytometry를 통해 이들 조직에서 CD4 T cell과 CD8 T cell 및 T cell 과 B cell의 비율을 알아보는 실험입니다.

목차

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본문내용

Flow cytometry를 이용한면역세포의 분리 및 분석
Abstract
이번 실험은 쥐를 대상으로 면역조직인 Thymus와 Spleen에서 세포들을 얻은 후, 표면 단백질인 CD4, CD8, CD#, B220에 대한 항체로 형광 염색한 후 Flow cytometry를 통해 이들 조직에서 CD4 T cell과 CD8 T cell 및 T cell 과 B cell의 비율을 알아보는 것이다. 형광물질은 FITC와 PE를 사용하였으며, Staining pattern을 읽기 위하여 FACS Caliber를 이용하였다. 실험 결과, Spleen에서는 전체 10000개의 세포 중 5415개 (54.15%)가 B cell이었으며, 3808개(38.08%)가 T cell이었다. 그리고 Thymus에서는 전체 10000개의 세포 중 1828개 (18.28%)가 Helper T cell(CD4 T cell)이었고, 462개 (4.62%)가 Cytotoxic T cell(CD8 T cell)이었으며, 7496개 (74.96%)는 CD4 분자와 CD8 분자를 동시에 가지고 있는 분화가 덜 된 면역세포임을 확인하였다.
Introduction
면역기관은 크게 면역세포가 생성되는 1차 면역기관(Central or primary lymphoid organ)과 면역세포가 유지되고, Adaptive immune response가 시작되는 2차 면역기관(Peripheral or secondary lymphoid organ)으로 나눌 수 있다. 1차 면역기관에는 Bone marrow와 Thymus가 있으며, 2차 면역기관에는 Spleen 및 Lymph node가 속하게 된다. 또한 면역세포도 주로 두 가지로 나눌 수 있는데, 첫 번째는 B lymphocyte 또는 B cell로서 활성화되면 Plasma cell로 분화되어 항체를 분비하는 세포이다. 두 번째는 T lymphocyte 또는 T cell로서 두 가지 종류가 있다. 하나는 바이러스에 감염된 세포를 파괴하는 Cytotoxic T cell이고, 나머지 하나는 분화되어 B cell이나 Macrophage 같은 다른 세포를 활성화 시키는 helper T cell이다. 대부분의 면역세포들은 그 크기가 작고, 특별한 특징이 없는 세포로서 세포내물질이나 기관도 적고, 대부분의 핵 염색사도 비활성화된 상태이다

참고자료

· Sambrook J. and D. W. Russell, Molecular Cloning: A laboratory manual, 3rd ed., Cold Spring
· Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, U.S.A, p5.62, pp6.28~6.29
· Charles A. Janeway, Jr.외 3인, Immunobiology, 6th ed., Garland Science, pp6~9, pp241~256
· Clinical cytometry society, Cytometry Part B: Clinical Cytometry, 2003, volume 52B issue 1, pp32~36 (http://www3.interscience.wiley.com/journal/102530909/abstract?CRETRY=1&SRETRY=0)
· Bric.postech.ac.kr