Western blot

소개

SDS PAGE에 이어서 Wesern blot을 실시하여 단백질을 검출한다

목차

Abstract
Introduction
Western blotting의 주요 특징
Materials & Methods
Results
Discussion
Reference

본문내용

Abstract
이번 실험은 SDS-PAGE에 이어서 Western blot을 진행했다. 크기별로 분류된 단백질을 Membrane에 Blotting 하고 1차, 2차 항체를 통해 기질과 반응시킴으로써 Hsp 17.7 이 있는 부위에서 발광반응을 일으켜 Film에서 확인되었다.
실험 결과 Leaf에서는 Heat shock을 가하지 않았을 때 Hsp 17.7이 거의 없는 것으로 나타났고 8시간, 12시간으로 Heat shock에 노출된 시간이 길어질수록 굵은 Band를 형성함으로써 더 많이 발현된다는 것을 알 수 있었다. Stem의 경우에서도 Heat shock에 노출된 시간이 길어질수록 Hsp 17.7의 발현이 증가하는 것으로 확인되었다. 그러나 Leaf와 다르게 Stem은 Heat shock을 가하지 않은 상태에서도 Hsp 17.7이 확인되었다. 이를 통해 Hsp 17.7은 열충격으로부터 당근을 보호하는 Chaperon적 역할 뿐만 아니라 다른 역할도 할 것이라는 추측을 할 수 있었다.
Introduction
Western blot analysis
Western blot analysis는 항체 분석법과 SDS-PAGE를 혼합한 것으로 단백질을 크기와 항체 결합 여부로서 분석할 수 있는 방법이다. 클로닝된 유전자 산물의 측정이나 세포 내에 특정 단백질의 존재 여부를 확인할 수 있다. SDS-PAGE 젤 상의 단백질을 전기장을 걸어주어 나일론 또는 나이트로셀룰로오스 필터로 옮긴다. 이렇게 옮기는 과정을 Blotting 이라고 하며 단백질은 필터에 강하게 결합한다. 필터에 항체를 처리하고 씻어준 후 효소가 결합되어 있는 2차 항체를 이어서 처리한다. 이 2차 항체에는 ELISA 검출법의 2차 항체와 같이 기질에 작용하여 색이 있는 침전물을 만들거나 형광을 나타내는 효소가 붙어있다. 이 효소에 의해 생성된 색이 있는 침전물은 나일론 필터에서 밴드로 확인할 수 있으며 생성물이 형광을 나타내는 경우 자기 방사선사진법으로 확인할 수 있다.
(유전공학의 이해 / 2008)

Western blotting의 주요 특징
1) Membrane의 종류
Western blot에 사용하는 membrane에는 크게 3 종류가 있다.

참고자료

· 분자생물학 입문서 / 최원재 / 월드사이언스 / 2009 / 251~255 P
· 유전공학의 이해 / 남상욱, 권혁빈 / 라이프사이언스 / 2008 / 170~172 P
· 임상 분자생물학 / 김은중 외 7명 / 고려의학 / 2010 / 101 , 111 P
· www.genehunters.co.kr -> Education -> Western blot Tab