중합효소 연쇄반응

소개

목차
+중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain reaction)

+PCR 산물의 연구

+PCR의 응용

목차

중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain reaction)
PCR 산물의 연구
PCR의 응용

본문내용

중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain reaction)
PCR은 DNA 분자 상에서 어떤 부분만을 선택적으로 증폭시킨다. 증폭하고자 하는 부위의 가장자리의 염기서열이 알려져 있다면 어떤 DNA분자의 어느 부위이건 선택할 수 있다. 그 주변의 염기서열을 알아야 하는 이유는 DNA 이중 나선의 각 사슬에 결합할 수 있는 두 개의 짧은 올리고뉴클레오티드 들이 있어야 PCR을 수행할 수 있기 때문이다. 이들 올리고 뉴클레오티드들은 DNA 합성에 대한 프라이머로 작용하며 어느 부분이 증폭될 것인가를 결정한다.
PCR 실험이 매우 쉽기는 하지마, 가치 있는 결과를 얻기 위해서는 아주 신중한 계획을 세워야 한다. 특히 플라이머의 염기서열과 반응 주기 동안의 가열과 냉각시 온도 등은 실험의 성공에 결정적인 요소이다.
프라이머는 PCR 실험의 성공 여부를 가리는 중요한 열쇠이다. 프라이머가 정확하게 디자인되면 주형 분자의 목적 위치에 해당하는 단일 DNA 단편만이 증폭되는 반면, 프라이머가 잘못 디자인된 경우에는 어떠한 단편도 증폭되지 않거나, 잘못된 단편이나 하나 이상의 단편이 증폭되게 된다. 그러므로 프라이머를 디자인 할 때는 많은 것이 신중히 고려되어야 한다.
프라이머의 염기서열은 주형 분자상의 목표 부위 근처의 염기서열과 일치하여야 하며 각각의 프라이머는 혼성화가 일어날 수 있도록 주형사슬에 상보적이어야한다.
결합된 프라이머의 3`말단이 서로 마주보는 방향으로 위치하여야 한다. 증폭시키고자 하는 DNA의 길이는 3kb이하이어야 하고 , 1kb이하가 적당하다.
적당한 프라이머의 길이는 17-mer 정도이다. 너무 짧으면 주형의 여러부분에 결합할수 있고 너무 길면 결합하는 속도가 느려진다.
PCR의 각 주기 동안 반응액에는 세 번의 온도 변화가 가해진다.

참고자료

· 없음