[공업미생물학실험] 세균의염색법(그람,내생포자염색법)

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최초 등록일
2002.05.09
최종 저작일
2002.05
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목차

1 주제
2 날자
3 그람염색
4 내생포자염색
5 참고문헌

본문내용

4. 내생포자염색
<원리>
Bacillus나 Clostridium속의 세균들은 물리적, 화학적으로 외부요인에 대해 상당한 내성을 갖는 내생포자를 형성한다. 이들 포자는 화학약품에 대해 내성을 가지므로 일반 염색법으로 염색되지 않는다. 물론 이 구조체를 염색하지 않고도 위상차현미경으로 직접 관찰할 수 있으며, 매질 염색이나, 그람염색시 염색되지 않는 고굴절의 구조체인 포자를 간접적으로 관찰 할 수도 있다. 또한 앞서 살펴본 Ziehl-Nelsen의 항산성 염색법을 사용하면 carbolfuchsin에 의해 붉게 염색된 포자를 직접 관찰할 수도 있다.

<방법>
Bacillus subtilis 또는 B. megaterium을 영양한천 사면배지에서 24~36시간 배양한 것, 0.5% malachite green 수용액, safranin O 수용액, 1.9*3.8cm 크기로 자른 여과지, 삼발이, 석면망
1) 균체를 슬라이드에 도말하고 건조시킨 후, 열고정한다.
2) 도말부위를 여과지로 덮고, malachite green 용액을 충분히 가한다.
3) Ziehl-Nelsen의 항산성 염색법과 마찬가지로 5분간 가열한다(직접 가열하는 대신, 비이 커 에 물을 담아 끓이고 그 위에 그 위에 슬라이드를 올려놓기도 함)
4) 슬라이드를 수돗물로 잘 세척한 후 safranin O로 30초간 대응염색한다.
5) 다시 수돗물로 세척하고, 흡지로 물기를 제거한 다음 관찰한다.
<내성포자의 모양과 위치>
참고 문헌

참고 자료

미생물학 실험/한국미생물학회-아카데미 서적
미생물학 실습/윤효숙, 황선철
도해 미생물학 핸드북/지성의 샘
http://www.rna.co.kr

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