DNA purification

소개

학교 도서관에서 자료를 찾아가며 썼기 때문에 principle이 알차고요,
실험고찰도 정말 단순히 감상문이 아니라 원리 중심으로 썼습니다.
이 자료보시고 꼭~ 좋은 학점 받으시길 바래요~

목차

#서론
1. 용리법
2. PCR product
3. Vector
4. 제한효소, ligase
#재료 및 방법
#결과 및 고찰

본문내용

1. 용리법
일반적으로 elution 이라 함은 용리법을 말한다. 크로마토그래피 실험조작에 있어서 이동상을 흘려주는 방법 중 가장 많이 이용되는 것이며, 용리법은 혼합성분의 각각의 분리 및 분석이 가능한 조작법이다. 이 방법의 특징은 정지상이 이미 이동상으로 포화된 상태에서 시료를 소량 주입하고 이동상을 흘려주면 시료가 두상에 대해서 상호작용으로 인해 일정한 분리 계수를 갖게 되어 상호분리가 된다. 이 방법에서 흘려주는 이동상을 용매 혹은 용리액이라고 부르며, 분리관을 통해 나온 용액을 용출액이라고 부른다. 정지상의 모양이 불규칙하고 크기가 달라 컬럼 내에서 시료 분자를 포함하는 이동상이 빠져나가는 통로도 일정하지 않고 큰 곳도 있고 작은 곳도 있다. 이런 불규칙성 때문에 어떤 물질은 큰 통로로 빨리 진행을 하고 작은 통로로 진행하는 물질은 조금 느리게 되어 띠가 넓어지는 현상을 보인다. 컬럼 내에서 여러 형태를 보이며 컬럼 내에 머무르는 현상들은 혼합물의 분리와 분석에 매우 중요한 요소이다. 혼합물 내의 각각 물질들이 어떤 양상을 보이며 진행되는 가에 따라 분리 및 분석 결과는 그 차이를 나타내기 때문이다. 이러한 분리현상의 원리를 바탕 하여 DNA를 전기 영동하여 관찰되는 band 중에서 특정한 band를 gel로부터 유리해낼 수가 있다. 이 방법은 재조합 DNA를 만들 때 대단히 중요하게 쓰이는 기술이므로 보다 회수율이 높고 용출(elution)된 DNA의 순수도가 보다 높고, 또한 보다 빠르고 간편하게 실행할 수 있는


#결과 및 고찰
우리는 저번 실험에서 DNA를 전기 영동해서 band를 얻었다. 이번 실험은 DNA 전기영동 해서 얻은 band에서 우리가 원하는 target DNA를 아가로스겔에서 잘라 DNA fragment로 분리하는 실험이였다. 우리는 PCR Purification Kit를 사용해서 실험을 했다. Kit를 사용하게 되면 무엇보다도 빠르고 간편하게 DNA fragment를 분리 할 수가 있다. 우리가 사용한 Kit는 column에 DNA가 binding 해서 따로 agarose를 녹이고 푸는 과정이 필요가 없다. Kit 말고, 실리카겔을 이용해서 분리하는 방법이 있는데 실리카겔의 흡착 성질을 이용하여, DNA를 분리하면 된다.
먼저 PCR product에 gel 무게의 5배의 PCR binding buffer를 넣어 주었다. PCR binding buffer는 Taq DNA polymerase, 효소, DNA 에 영향을 주는 것을 모든 inactive 한 상태로 만들어 준다. 이 때 vortexing 해서 잘 섞이게 해주는데, 우리 조는 pipetting을 해서 골고루 섞이게 해주었으므로 하지 않았다. tube를 원심분리해주면 DNA binding filter column에 DNA가 붙고, 그 외 물질은 tube 밑으로 가라앉게 된다. 즉, DNA 들이 컬럼 membrane에 붙게 되는 것이다.
그 다음 DNA binding column에 buffer를 500ul를 넣어준다.

참고자료

· - 분자생물학/ 한국분자생물학회 편 /아카데미서적 / p.17~21 / 1998
· - 유전공학/ 이동환 외 6명 / 문운당/ p.52~54 / 1991
· - 유전자의 분자생물학 / 고상균 / 탐구당 / p. 744 ~ 745 / 1991
· - 유전자 진단의 이론과 실제 / 김영설 외 / 한의원 / p. 41 ~ 46 / 1999
· - 알기 쉽고 재미있는 분자 생물학 / David P. Clark, Lonnie D. Russell / 이명석 / 라이프 사이언스 / p.98 / 2007
· - http://blog.naver.com/malbokgi?Redirect=Log&logNo=40012962917