항체제조 및 Western blotting

소개

항체제조 및 Western blotting에 관한 실험보고서(예비, 결과 합본)

목차

Abstract.
Introduction.
Material & Method
Data & Result
Discussion
Reference

본문내용

Abstract

이번 실험은 우리가 목적하는 His - tag GFP를 항원으로 이용하여 우리가 원하는 단백질인 antibody를 Western blotting을 통해 확인하는 실험을 하였다. 세포학에서 많이 사용하는 항체는 특정 항원에 해당하는 물질의 유무, 세포내의 분포, 많고 적음을 알 수 있는 좋은 시료이다. 이번 실험에서는 세포학 연구에 많이 쓰이는 항체를 얻기 위하여 쥐에 항원으로 GFP를 injection하였다. Injection시 면역반응을 최대화하기 위하여 면역반응 촉진제로 Fruend`s Adjuvant를 사용하였는데, 첫 번째 접종에선 죽은 Mycobacterium을 포함한 Complete Freund`s Adjuvant(CFA)를 항원과 1:1비율로 섞은 후 사용하였다. 총 3주에 걸쳐 3번의 항원 injection이 이루어 졌는데 두 번째와 세 번째 injection시에는 Mycobacterium이 포함되지 않은 Incompete Freunds Adjuvant(IFA)를 항원과 1:1비율로 혼합하여 주입하였다. 이렇게 3주후에 3차 접종까지 끝낸 쥐에서 혈액 500ul을 얻어내었다. 다음 아미노산, 단백질, 핵산등과 같은 하전 된 물질들을 분리하는데 매우 효과적인 수단으로 이용되는 전기영동(electrophoresis)을 이용하여 단백질을 분리하였는데 SDS-PAGE를 이용하였다. 이 분리한 gel상태에서의 항원 GFP를 전기에 의해 nitrocellulose membrane에 transfer 한 후 쥐에서 추출한 serum을 western blot 시켜서 쥐에서 항원에 대한 항체가 생성되었는지 알아보았다. 이 immuno blotting 시에는 skim milk를 사용하여 비특이적인 결합을 막는 blocking을 하여야 한다. 쥐에서 뽑아낸 serum을 primary antibody로 사용하고 alkaline phosphatase를 secondary antibody로 사용하여 immuno blotting을 한 결과 쥐에서 GFP에 대한 항체가 생성되었음을 알 수 있었다.

Introduction

면역글로불린(항체, antibody)은 면역계의 단백질이다. 그것의 기능은 특이한 외부분자(항원, antigen)와 상호작용하여 그들을 불활성으로 만든다. 이런 상호작용을 항원항체 반응이라 한다. 가장 잘 알려진 면역글로불린은 Ig G이다.

참고자료

· 한국생화학회, 실험생화학, 탐구당, 1997, pp95~101
· David L. Nelson, Lehninger 생화학 4th, 월드사이언스, 2006, pp147~153
· 박상대, 분자세포생물학 1st, 아카데미서적, 1999, pp14~15