역전사 실시간 Recombinase Polymerase Amplification (RT/RT RPA)에 의한 꿀벌Black Queen Cell Virus의 신속 검출 (Rapid Detection of Black Queen Cell Virus from Honeybee using Reverse Transcription Real-Time Recombinase Polymerase Amplification (RT/RT RPA))

서지정보

· 발행기관 : 한국양봉학회
· 수록지 정보 : Journal of Apiculture / 31권 / 1호 / 41 ~ 50페이지
· 저자명 : 임수진, 윤병수, Giang Thi Huong Luong, 민상현, 왕지희

초록

여왕벌 흑색병 바이러스(BQCV)는 꿀벌의 바이러스성 병원체로, 역전사 실시간 중합효소연쇄반응(RT/RT PCR)에 의해 검출된다. 본 연구는BQCV의 검출에 Recombinase polymerase amplification (RPA)법을적용하였으며 BQCV 특이적인 실시간 RPA법을 응용하여 BQCV에 특이적인 역전사 실시간 DNA 증폭 기법을 새로이 개발하였다.
Real-time RPA는 37°C 등온조건에서 40분간 수행하였으며 특이 DNA 증폭은 형광 감지기로 실시간 측정하였다. Real-time RPA에 의한 BQCV 특이적인 DNA 증폭은, RPA 반응시작 3분 26초만에 검출할 수 있었으며, 동량의 초기주형을 사용한 Real-time PCR은 41 분 42초의 시간이 소요되었다. BQCV에 감염된 꿀벌에서 합성된 cDNA를 주형으로 한 Real-time RPA에서는 4분 18초에 유전자 증폭이 인식된 반면, 동량의 같은 주형을 사용한 Real-time PCR은 66분 5초의 시간이 소요되었다. 나아가, BQCV에 감염된 꿀벌로부터분리한 전체 RNA를 주형으로 역전사효소와 RPA 용액을 혼합하여 실시한 통합 역전사 실시간 RPA (onestep RT/RT RPA)는 8분 36초에서 BQCV 특이적인DNA의 증폭을 확인할 수 있었다.

영어초록

Black Queen Cell Virus (BQCV) is one of pathogenic virus in honeybee which could be detected using reverse transcription real-time PCR (RT/RT-PCR). In this study, for rapid detection of BQCV, Recombinase Polymerase Amplification (RPA) was applied, and BQCV-specific reverse transcription real-time RPA (RT/RT-RPA) method was newly developed based on BQCV-specific RT/RT PCR. The Real-time RPA (RT-RPA) was performed at 37°C isothermal condition for 40 minutes. During the experiments, specific DNA amplifications were real-timely monitored using fluorescent detector. BQCV-specific DNA amplification could be detected from 3 min 26 sec after RPA reaction with specific DNA templates by RT-RPA, while 41 min 42 sec was required by qRTPCR with same quantities of initial templates. With generated cDNA from BQCV-infected honeybee, specific DNA amplification was recognized at 4 min 18 sec using RT-RPA, however, 66 min 5 sec was needed using Real-time PCR. Moreover, with reverse transcriptase and RPA solution, BQCVspecific DNA amplification could be detected at 8 min 36 sec from total RNA of BQCV-infected honeybee using one-step Reverse Transcription/Real-Time RPA (RT/RT-RPA).

참고자료

· 없음