[인천대 생명공학실험3 A+] eGFP 단백질 생산분석 실험결과 보고서 [SDS-PAGE(SDS 전기영동), Soluble단백질, Insoluble단백질]

소개

A+를 쉽게 받을 수 있도록 매우 정리가 잘 되어 있는 [BCA assay를 이용한 eGFP 형광측정]단백질 정량분석&활성측정 실험결과 보고서 입니다.
SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-Poly Acrylamide Gel Electrophoresis), 각 buffer의 역할, Coomassie blue staining 및 destaining, CellNest marker와 eGFP 관계, 세포 파쇄 목적 및 기타 파쇄 방법, 초음파 파쇄의 원리, Image J 소프트웨어, Soluble, insoluble 단백질 특징과 purification 방법, 샘플을 얼음에서 보관하는 이유 등에 대한 이론을 포함하고 있습니다.
이론 외에 실험결과와 오차의 원인까지 포함한 고찰 및 결론 또한 체계적으로 꼼꼼히 적혀있습니다.

목차

1. Date
2. Title
3. Purpose
4. Principle
5. Materials & Methods
6. Result
7. Discussion
8. Conclusion
9. Reference

본문내용

3. Purpose
이번 실험에서는 SDS-PAGE를 이용해 시간별(0-4h) 및 soluble/insoluble 샘플의 단백질 밴드를 관 찰하여 단백질의 발현정도와 soluble, insoluble 여부를 통해 eGFP를 분석한다.

<중 략>

5. Materials & Methods
Materials:
SDS 젤, CellNest marker, 5X Loading/1X Running/Coomassie Staining/Coomassie Destaining buffer, Running set, Power Supply, Chemi Doc.

Methods
SDS PAGE: 시간별 샘플에 PBS 1mL씩 넣고 파이펫팅. 튜브에 각 샘플별로 80uL씩 분주 후 4hr 샘플을 초음파로 파쇄(AMP25%,4분,5초 on/off). 샘플 100uL을 튜브에 담고 4℃ 13000rpm,15분 원심분리. 상층액 80uL 분리 후 펠렛에는 1X 샘플버퍼 100uL을 넣음. 여기에 insoluble 을 제외한 모든 샘플에 5X 샘플버퍼(4도보관)를 20uL을 넣음.

참고자료

· Michael T. et al., Brock의 미생물학 11th, PEARSON 297,307,324
· Reece et al., Campbell Biology Concept & Connection, 2011, PEARSON, p 67, 69, 184
· Joanne M. Willey et al., Prescott’s Microbiology 9th, 2016,라이프사이언스, p 48-51, 138, 274