ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)를 통한 CHO, HEK 항체 검출

소개

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목차

1. Introduction
2. Result
3. Discussion
4. Reference

본문내용

Introduction
ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)는 항원-항체 반응을 이용하여, 생체 내 특정 단백질이나 항체를 정량적으로 분석하는 분석법이다. 주로 혈청, 세포 배양 상층액, 조직 추출물 등 다양한 시료를 분석하며 바이오의약품 개발, 질병 진단, 백신 평가 등 다양한 분야에서 사용되어진다.
ELISA는 그 방식에 따라 크게 Direct, Indirect 두 가지로 분류된다. Indirect ELISA 중 Sandwich ELISA는 가장 보편적으로 사용되는 방법으로 두 종류의 항체를 이용해 분석 대상을 샌드위치 형태로 포획하는 방식으로, 높은 특이성과 민감도가 특징이다. 특히 분석 대상이 복잡할 경우, 신뢰할만한 결과를 도출할 수 있다는 점에서 실험실과 산업 현장에서 자주 사용된다.
이번 실험에서는 Sandwich ELISA를 이용해 CHO(Cell Chinese Hamster Ovary) 세포와 HEK(Human Embryonic Kidney) 세포에서 발현된 항체의 농도를 비교하였다.

Result
sandwich ELISA를 이용하여 CHO 세포(stable expression) 및 HEK 세포(transient expression)에서 생성된 항체를 정량적으로 분석하였다. 항체의 농도는 표준 시료 A~H를 사용하여 100 ng/mL부터 0.78 ng/mL까지 1/2씩 단계 희석한 방식으로 설정하였으며, 각 농도에 대한 OD 값을 450 nm에서 측정하고, 표준곡선 데이터를 얻었다
CHO 세포 유래 항체 시료(A~E)와 HEK 세포 유래 항체 시료(F, G), 그리고 blank 시료(H, TBST 처리)를 측정하였다.

참고자료

· R&D Systems. 2020. ELISA Guide: A Clear and Easy Guide to ELISAs. Minneapolis, MN: R&D Systems, a Bio-Techne brand.
· Thermo Scientific. n.d. ELISA Technical Guide and Protocols. Tech Tip #65. Rockford, IL: Pierce Biotechnology, Thermo Fisher Scientific. https://www.thermo.com/pierce
· Crowther, John R. 2009. The ELISA Guidebook. 2nd ed. Methods in Molecular Biology. New York: Humana Press. https://doi.org/10.1007/978-1-60327-254-4
· Corning Life Sciences. 2017. Effective Blocking Procedures in ELISA Assays. Corning Application Note. Corning Incorporated
· Esser, Peter. 2014. Blocking Agent and Detergent in ELISA. Thermo Fisher Scientific Application Note. Thermo Fisher Scientific Inc
· Pearce Pratt, Rachel, and Bruce Roser. 2014. Comparison of Blocking Agents for ELISA. Thermo Fisher Scientific Application Note. Cambridge Research Laboratories, Quadrant Research Foundation
· Azure Biosystems. n.d. Western Blotting Guidebook: Principles, Protocols, and Optimization Tips. Dublin, CA: Azure Biosystems. https://azurebiosystems.com/wp-content/uploads/2021/12/Western-Blotting-Guidebook.pdf
· Porsch-Özcürümez, Mustafa, Nele Kischel, Heidi Priebe, Wolf Splettstösser, Ernst-Jürgen Finke, and Roland Grunow. 2004. “Comparison of Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, Western Blotting, Microagglutination, Indirect Immunofluorescence Assay, and Flow Cytometry for Serological Diagnosis of Tularemia.” Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology 11 (6): 1008–1015. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.6.1008-1015.2004
· De Lin, William E. Alborn, Robbert J. C. Slebos, and Daniel C. Liebler. 2013. “Comparison of Protein Immunoprecipitation–Multiple Reaction Monitoring with ELISA for Assay of Biomarker Candidates in Plasma.” Journal of Proteome Research 12 (12): 5996–6003. https://doi.org/10.1021/pr400877e