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[A+ 리포트] Crystal violet staining (세포생물학실험)

본 리포트는 세포생물학실험 중 crystal violet staining에 관한 실험 프로토콜 리포트입니다. 참고 바랍니다.
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최초등록일 2023.01.05 최종저작일 2021.12
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[A+ 리포트] Crystal violet staining (세포생물학실험)
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    소개

    본 리포트는 세포생물학실험 중 crystal violet staining에 관한 실험 프로토콜 리포트입니다.
    참고 바랍니다.

    목차

    1. Meterial Preparation
    2. Observation of cells using Microscope
    3. Removal of media in 6well plate
    4. PBS washing
    5. Cell Fixation using Methanol
    6. Removal of Methanol in 6well plate
    7. Crystal violet staining
    8. Rinsing of staining solution using D.W
    9. Dry & Observation of stained cells using microscope
    10. Discussion (Experimental Result included)

    본문내용

    1. Material Preparation
    - 실험 재료 및 기구 : HeLa cell이 subculture되어 있는 6well plate, 1X PBS, Methanol, Crystal violet staining solution, Microscope, Micropipette (P1000), pipette tips(blue), 10ml serological pipette, pipette aid, D.W, Rack, 티슈, 폐기용 통, 타이머(휴대폰), 70% ethanol, 라텍스 장갑.

    2. Observation of cells using Microscope
    1) 70% ethanol로 라텍스 장갑을 착용한 양측 손을 소독함.
    2) Incubator에 있는 HeLa cell이 subculture되어 있는 6well plate를 꺼냄.
    3) Microscope의 재물대를 70% ethanol로 소독한 뒤 6well plate를 재물대 위에 위치시킴.
    4) Resuspension 산물이 서로 다른 volume(좌측 well서부터 2µl, 20µl, 200µl)으로 가해진 upper row의 3개의 well을 좌측에서부터 차례대로 관찰함.
    ※ 참고사항 : 이 과정은 지난 실험 간 seeding한 cell들이 제대로 subculture가 되었는지를 확인하는 과정이다.
    5) 관찰이 완료된 6well plate를 실험 테이블에 위치시킴.

    참고자료

    · 없음

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    • 1. Crystal violet staining
      Crystal violet staining is a widely used technique in microbiology and cell biology for the visualization and identification of various types of cells and microorganisms. This staining method is particularly useful for the differentiation of Gram-positive and Gram-negative bacteria, as it can help distinguish their cell wall structures. The process of crystal violet staining involves the following steps: 1. Fixing the sample: The sample, which can be a bacterial smear or a tissue section, is fixed onto a slide to prevent the cells from being washed away during the staining process. 2. Applying crystal violet: The fixed sample is then covered with a crystal violet solution, which is a basic dye that binds to the negatively charged components of the cell wall and cytoplasm. 3. Applying iodine solution: After a brief incubation, an iodine solution is added, which forms a crystal violet-iodine complex within the cells. 4. Decolorization: The slide is then rinsed with a decolorizing agent, such as ethanol or acetone, which selectively removes the crystal violet-iodine complex from the Gram-negative bacteria, leaving the Gram-positive bacteria stained. 5. Counterstaining: Finally, a counterstain, such as safranin or basic fuchsin, is applied to the slide, which stains the Gram-negative bacteria a different color, allowing for easy differentiation between the two bacterial types. The effectiveness of crystal violet staining lies in its ability to highlight the structural differences between Gram-positive and Gram-negative bacteria. Gram-positive bacteria, with their thick peptidoglycan cell walls, retain the crystal violet-iodine complex and appear purple or blue, while Gram-negative bacteria, with their thinner cell walls, lose the complex during the decolorization step and appear pink or red. This staining technique is widely used in clinical microbiology laboratories for the rapid identification of bacterial pathogens, as well as in research settings for the study of cell morphology and the characterization of microbial communities. Its simplicity, reliability, and cost-effectiveness make it an essential tool in the field of microbiology.

  • 자료후기

      Ai 리뷰
      이 문서는 Crystal violet staining 실험 프로토콜을 매우 구체적이고 상세하게 기술하고 있으며, 실험 결과에 대한 분석과 고찰 내용을 포함하고 있어 실험 수행에 도움이 될 것으로 보인다.

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