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대장균에서 재조합 단백질 생산 및 정제2025.01.131. 재조합 단백질 생산 대장균 BL21(DE3) 균주는 재조합 단백질 고발현에 널리 사용되며, lac 프로모터와 T7 프로모터를 이용하여 IPTG 유도 하에 단백질을 발현할 수 있다. 본 실험에서는 pET28a 벡터를 사용하여 His-tag 융합 단백질을 생산하고, Ni-NTA 친화성 크로마토그래피와 FPLC를 통해 단백질을 정제하는 방법을 익혔다. 2. 단백질 분석 SDS-PAGE를 통해 단백질 크기별 분리와 정제 과정을 확인하였고, Bradford assay로 단백질 농도를 정량하였다. 또한 DES와 OASS 효소 활성 측정을...2025.01.13
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대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험2025.01.131. IPTG IPTG는 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다. 2. Buffer condition Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-ba...2025.01.13
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DNA, RNA 백신2025.01.181. DNA, RNA 백신의 작용 메커니즘 DNA와 RNA 백신은 세포 내로 도입되어 단백질로 번역되는 과정을 거치며, 이를 통해 MHC-I 및 MHC-II 경로를 활성화하여 CD8+ T 세포와 CD4+ T 세포를 자극하여 면역 반응을 유도한다. DNA 백신의 경우 DNA가 mRNA로 전사되고 단백질로 번역되는 과정을 거치며, RNA 백신은 ORF, 5'/3'-UTR, cap 구조, polyA tail 등을 포함하여 효율적인 단백질 생산을 도모한다. 2. 핵산 기반 백신의 장단점 핵산 기반 백신의 장점은 제조가 용이하고 저렴하며, ...2025.01.18
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항체 생산 실험: GFP 항원을 이용한 면역반응 유도2025.11.171. 항체 생산 (Antibody Production) 특정 동물에 항원을 주입하여 항체 형성 반응을 유도하는 과정입니다. 본 실험에서는 마우스(Mus musculus)에 GFP 항원을 복강 주사로 3회 투여하여 2차 면역반응을 유발했습니다. 1차 접종에는 Complete Freund's Adjuvant (CFA)를, 2차, 3차 접종에는 Incomplete Freund's Adjuvant (IFA)를 사용했습니다. 최종적으로 심장 채혈을 통해 혈액을 채취하고 원심분리로 혈청을 얻어 항체를 수집했습니다. 2. 면역반응 메커니즘 (I...2025.11.17
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담배 일시적 발현 시스템과 공동면역침전법2025.11.121. 담배 일시적 발현 시스템 (Tobacco Transient Expression System) 담배 식물을 이용한 일시적 단백질 발현 시스템으로, 식물 바이러스 벡터를 활용하여 외래 유전자를 식물 세포에 빠르게 도입하고 단기간에 고수준의 단백질을 생산하는 기술입니다. 이 방법은 재조합 단백질 생산, 백신 개발, 항체 생산 등 다양한 생명공학 응용 분야에서 효율적인 단백질 발현 플랫폼으로 활용됩니다. 2. 공동면역침전법 (Co-Immunoprecipitation, Co-IP) 단백질 간의 상호작용을 분석하는 생화학적 기법으로, 특...2025.11.12
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단백질 정제2025.01.231. 재조합 단백질 발현 재조합 단백질 기법은 정제하려고 하는 단백질의 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입한 후, 이 플라스미드 벡터를 다시 세포에 도입하면 그 세포가 도입된 외부 유전자를 마치 원래 자기가 가지고 있던 유전자인 것처럼 발현을 하는 방법이다. 이번 단백질 정제실험에서 사용하는 플라스미드인 pET28a Vector는 kanamycin이라는 항생제에 대한 저항성을 부여하는 유전자인 KanR을 갖고 있어, 배양액에 kanamycin 항생제를 넣어놓고 그곳에 대장균을 넣으면 KanR을 갖고 있는 플라스미드인 pET28a Vec...2025.01.23
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재조합 DNA 구성 및 대장균에서의 GFP 발현2025.11.121. 재조합 DNA 구성 재조합 DNA는 서로 다른 출처의 DNA 단편을 결합하여 새로운 DNA 분자를 만드는 기술입니다. 제한효소를 이용하여 DNA를 절단하고 DNA 리가제로 연결하는 과정을 통해 목적하는 유전자를 벡터에 삽입합니다. 이 기술은 유전공학의 기초가 되며 단백질 생산, 유전자 치료 등 다양한 분야에 응용됩니다. 2. GFP 형질전환 GFP(Green Fluorescent Protein)는 녹색 형광 단백질로, 자외선 또는 청색광에 노출되면 녹색 형광을 발합니다. GFP 유전자를 대장균에 형질전환하면 형광 단백질을 생산...2025.11.12
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크로마토그래피에 의한 단백질 정제 탐구2025.01.291. 단백질 정제 단백질 정제는 정제된 단백질을 분리하고 얻는 과정이다. 유전자 재조합 이후, 단백질 발현 과정을 거쳐 단백질 정제 단계에서 단백질을 정제할 수 있는 다양한 크로마토그래피 기법이 있다. 이러한 기술을 통해 특정 단백질을 정밀하게 분리할 수 있으며 바이오 의약품, 생명공학 및 기초 연구 분야에 적용하여 활용될 수 있다. 2. 크로마토그래피 기법 크로마토그래피는 단백질 정제에 사용되는 다목적 기술로, 전하 기반 분리를 위한 이온 교환, 특정 결합 상호작용을 활용한 친화성, 크기 기반 분리를 위한 크기 배제가 포함된다. ...2025.01.29
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균류의 최신이용분야 - 효모2025.11.161. 효모의 기본 특성 및 분류 효모(Yeast)는 균계에 속하는 단세포의 진핵미생물로 Ascomycota와 Basidiomycota 두 개의 문에 분포된다. Saccharomyces는 가장 흔히 언급되는 효모로, S. cerevisiae는 제빵에, S. ellipsoideus는 알코올 발효에 주로 사용된다. 효모는 길이 8μm, 직경 5μm 정도의 단일 세포이며, 세포질은 비타민B가 풍부하여 영양보조제로 활용된다. 2. 효모 엑기스의 제조 및 응용 효모 엑기스는 효모의 자기소화능력에 의해 핵구성물질과 단백질이 글루타민산을 포함하는...2025.11.16
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백신요법은 면역의 어떤 특징을 활용한 방법인지 서술하고, RNA백신과 기존 백신의 특징, 장단점 등을 비교하시오2025.01.241. 백신요법과 능동면역, 수동면역 비교 백신요법은 병원체에 대한 면역 반응을 유도하기 위해 설계된 예방의학 방법이다. 백신 접종을 통해 유도되는 능동면역은 장기적인 면역력을 제공하지만 시간이 걸리는 반면, 수동면역은 즉각적인 보호를 제공하지만 지속성이 떨어진다. 능동면역과 수동면역은 각각의 장단점이 있어 상황에 따라 선택적으로 사용된다. 2. RNA 백신의 정의 RNA 백신은 병원체의 단백질을 직접 주입하는 대신 그 단백질을 생성하는 유전물질인 메신저 RNA(mRNA)를 사용하여 면역 반응을 유도하는 백신이다. RNA 백신은 기존...2025.01.24
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