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분자생물학 실험 (A+) DNA ligation and transformation 결과보고서2025.01.041. DNA 연결(ligation) DNA 연결(ligation) 실험을 통해 DNA 단편을 벡터에 삽입하는 과정을 수행했습니다. 이를 통해 재조합 DNA를 만들어 대장균에 형질전환하는 실험을 진행했습니다. 실험 결과 성공적으로 재조합 DNA를 만들어 대장균에 도입할 수 있었습니다. 2. 형질전환(transformation) 대장균에 재조합 DNA를 도입하는 형질전환 실험을 수행했습니다. 실험 결과 형질전환된 대장균 세포를 선별할 수 있었고, 이를 통해 재조합 DNA가 성공적으로 도입되었음을 확인할 수 있었습니다. 1. DNA 연결...2025.01.04
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DNA 클로닝 및 PCR 실험을 통한 DNA 기술 이해2025.11.161. DNA 클로닝 및 형질전환 DNA 클로닝은 원하는 DNA를 조작하고 복제하여 많은 복제 DNA를 얻는 기술입니다. 형질전환은 외부 유전자를 세포 내로 넣어 숙주세포가 새로운 유전형질을 갖게 되는 과정입니다. E.coli의 형질전환은 화학적 형질전환과 전기천공법으로 나뉘며, 화학적 형질전환은 CaCl2를 처리하여 세포벽을 중성화하고 heat shock을 통해 DNA 이동을 촉진합니다. Plasmid는 origin, MCS, lacZ 유전자, ampicillin resistance gene으로 구성되어 있습니다. 2. PCR(중합...2025.11.16
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박테리아 형질 전환, DNA 준비, 제한효소를 이용한 DNA 절단 실험 예비 및 결과 보고서2025.01.041. 박테리아 형질 전환 박테리아 형질 전환은 박테리아 세포가 외부 DNA를 흡수하여 새로운 유전적 특성을 획득하는 과정입니다. 이를 통해 박테리아는 항생제 내성, 독소 생산 등의 새로운 기능을 얻을 수 있습니다. 이 실험에서는 박테리아 형질 전환 과정을 수행하고 그 결과를 보고하고 있습니다. 2. DNA 준비 DNA 준비 과정에서는 DNA를 추출, 정제하여 실험에 사용할 수 있는 상태로 만드는 것이 중요합니다. 이를 통해 순수한 DNA를 얻을 수 있으며, 후속 실험에 활용할 수 있습니다. 3. 제한효소를 이용한 DNA 절단 제한효...2025.01.04
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형질전환과 블루-화이트 스크리닝 실험2025.11.171. 형질전환(Transformation) 형질전환은 외부의 DNA 또는 플라스미드가 세포에 도입되어 새로운 유전형질을 획득하는 현상입니다. 자연계에서는 세균 성장 곡선의 정체기에 주로 발생하지만, 실험실에서는 화학적 또는 물리적 처리를 통해 수용능 있는 세포(competent cell)를 만들어 효율적으로 형질전환을 수행합니다. 본 실험에서는 CaCl2 처리를 통해 TOP10 E.coli competent cell을 준비하고, heat shock 방식으로 플라스미드 DNA를 세포 내로 도입했습니다. 2. 블루-화이트 스크리닝(Bl...2025.11.17
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DNA 기술을 이용한 형질전환 및 PCR 실험2025.11.171. DNA 클로닝 및 형질전환(Transformation) DNA 클로닝은 DNA를 재조합하고 숙주 안에서 복제하는 과정이다. 대장균 형질전환을 위해 competent cell을 준비하고 플라스미드를 도입한 후 열충격(heat shock)을 가한다. X-gal/IPTG가 포함된 고체배지에서 배양하면 형질전환된 세포는 흰색 colony를, 형질전환되지 않은 세포는 파란색 colony를 형성한다. 이는 LacZ 유전자의 발현 여부에 따른 결과로, 외부 DNA가 삽입되면 LacZ 발현이 억제되어 β-galactosidase가 생성되지 ...2025.11.17
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대장균 형질전환을 위한 Competent Cell 제조2025.11.141. Competent Cell 제조 낮은 온도에서 세포막 인지질의 유동성을 감소시키고, 염화칼슘으로 세포막의 음전하를 감소시켜 competent cell을 제조한다. 제조된 competent cell은 글리세롤에 현탁시켜 cell stock으로 보관된다. Competent cell은 외부 DNA 삽입이 용이하도록 화학적으로 처리된 대장균 세포로, 형질전환에 필요한 수용성 세포이다. 2. 형질전환 및 대장균 사용 이유 형질전환은 외부 DNA를 세포 내에 삽입하여 세포의 형질을 변환시키는 유전자 재조합 방법이다. 대장균을 사용하는 이...2025.11.14
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효모 유전자 녹아웃(Gene Knockout) 실험 보고서2025.11.141. 유전자 녹아웃(Gene Knockout) 유전자 녹아웃은 특정 유전자의 기능을 분석하기 위해 그 유전자를 무력화하는 기술입니다. 기능적 단백질에 대한 유전정보를 삭제하는 효소를 이용하여 DNA 단편을 절단하며, 주로 상동 재조합에 의해 진행됩니다. 본 실험에서는 효모의 MET2 유전자를 마커 유전자인 URA3로 치환하여 녹아웃을 수행했습니다. 이 과정을 통해 MET2 유전자가 메티오닌 생합성에 관여함을 확인할 수 있었습니다. 2. 상동 재조합(Homologous Recombination) 상동 재조합은 상동인 두 개의 DNA ...2025.11.14
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DNA 연결 및 형질전환, 플라스미드 추출 및 제한효소 절단2025.11.171. T4 DNA Ligase와 DNA 연결(Ligation) T4 DNA ligase는 T4 박테리오파지에서 유래한 효소로, DNA의 3'-OH와 5'-P 사이에 phosphodiester 결합을 형성하여 DNA를 연결한다. Ligation buffer에는 Tris-HCl(pH 7.6), MgCl2, DTT, ATP가 포함되며, 각각 완충작용, cofactor 제공, 환원환경 조성, cofactor 제공의 역할을 한다. Self-ligation 방지를 위해 double-digestion(서로 다른 제한효소 사용) 또는 alkali...2025.11.17
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P1 박테리오파지를 이용한 형질도입 실험2025.11.111. 박테리오파지(Bacteriophage) 박테리오파지는 박테리아를 감염시키는 바이러스로, 단백질 구조로 둘러싸인 핵산 분자로 구성된다. 유전물질은 ssRNA, dsRNA, ssDNA, dsDNA 등이 원형 또는 선형으로 배열되어 있다. 박테리오파지는 머리와 꼬리로 구성되며, 약 96%는 숙주세포에 유전물질을 주입할 때 사용하는 꼬리를 가지고 있다. 독성파지와 온건성 파지로 구분되며, 용균성 생활사(lytic cycle)와 용원성 생활사(lysogenic cycle)를 거친다. 2. P1 박테리오파지 P1은 대장균과 일부 박테리아...2025.11.11
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[화학과 수석의 A+ 레포트][조교피드백 포함] 박테리아의 형질전환 (생화학실험)2025.01.161. 형질전환 이번 실험에서는 플라스미드와 박테리아를 이용해 형질 전환한다. 클로닝이란 관심있는 DNA를 많이 만들어내기 위해 박테리아를 이용하는 것을 말한다. 박테리아에 관심있는 DNA 조각을 집어넣고 키우면 관심있는 DNA도 여러개 만들 수 있게 된다. 플라스미드는 박테리아에 DNA를 넣어주기 위한 운반체 역할을 한다. 형질전환 시키는 방법으로는 화학적처리법과 전기천공법이 있으며, 이번 실험에서는 화학적 처리방법으로 CaCl2를 넣어주는 방법을 사용했다. 2. 플라스미드 플라스미드란 세균의 세포 내에 염색체와 별도로 존재하면서 ...2025.01.16
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