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PCR과 전기영동을 이용한 DNA 증폭 및 분석2025.11.141. 중합효소연쇄반응(PCR) PCR은 특정 표적 유전물질을 증폭하는 검사법으로, 소량의 DNA로부터 염기 순서가 동일한 유전물질을 대량으로 증폭할 수 있다. 열변성(94℃), 결합(62℃), 신장(72℃)의 3단계를 반복하며, 각 사이클마다 DNA가 2배로 증폭되어 n회 반복 시 2의 n승배 증폭이 가능하다. 인간의 DNA 증폭을 통한 유전질환 진단, 세균·바이러스·진균의 감염성 질환 진단 등에 활용된다. 2. DNA 구조 및 복제 DNA는 두 뉴클레오타이드 선형 중합체가 반대 방향으로 이중나선 구조를 형성하며, 염기는 나선 내부...2025.11.14
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제한효소를 이용한 DNA 절단 및 전기영동법과 PCR에 의한 DNA 분리 및 확인2025.01.071. PCR PCR의 기본 원리는 DNA를 단일가닥으로 열변성시킨 후 올리고뉴클레오티드를 결합시키고 DNA 중합효소로 DNA를 합성하는 과정을 반복하여 DNA를 증폭하는 것입니다. PCR에 필요한 주요 요소로는 주형 DNA, 시발체, dNTPs, Taq 중합효소, MgCl2 등이 있으며, 이들의 농도와 반응 조건을 최적화하는 것이 중요합니다. PCR 산물은 전기영동으로 확인할 수 있습니다. 2. 전기영동 전기영동은 DNA 분자의 크기와 전하에 따라 이동 속도가 달라지는 원리를 이용하여 DNA 단편을 분리하는 기술입니다. 아가로스 겔...2025.01.07
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[만점자료] DNA전기영동과 SDS-PAGE 실험 보고서2025.01.231. DNA 전기영동 DNA 전기영동은 PCR을 통해 유전자를 증폭시킨 후, 전기를 이용해 DNA를 크기별로 분리하는 기술이다. PCR은 DNA 변성, Primer 부착, 신장 과정을 거치며 유전자를 지수적으로 증폭시킬 수 있다. 아가로오스 겔 전기영동은 한천을 이용해 만든 겔을 통해 DNA를 크기별로 분류할 수 있다. 실험 결과에서는 원래 플라스미드, 제한효소 처리 플라스미드, PCR 증폭 산물 등의 밴드를 확인할 수 있었다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 SDS를 이용해 단백질에 균일한 음전하를 부여하고, 폴리아크릴아마...2025.01.23
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[일반생물학실험] Plasmid DNA - 전기영동2025.01.031. DNA 전기영동 DNA 전기영동은 DNA를 크기에 따라 분리하는 기술입니다. DNA는 인산기를 가지고 있어 전기영동 완충용액에서 음전하를 띠게 되며, 전류를 흘려주면 양극 쪽으로 이동하게 됩니다. DNA 분자량이 클수록, agarose 농도가 높을수록, 전압이 낮을수록 이동속도가 느려집니다. 또한 DNA 구조에 따라서도 이동속도가 달라집니다. 전기영동 후 ethidium bromide로 염색하면 UV 조사 시 형광을 발하여 DNA를 확인할 수 있습니다. 1. DNA 전기영동 DNA 전기영동은 생명과학 분야에서 매우 중요한 기술...2025.01.03
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플라스미드 DNA 추출 및 전기영동 실험2025.11.181. 플라스미드 DNA 플라스미드는 세균의 세포 내에 염색체와 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA 분자이다. 생장에 필수적인 유전자는 아니지만 특정 환경에 생존하기 위해 중요한 기능을 수행한다. 유전공학에서 제한효소로 끊은 후 필요한 유전자를 삽입하여 유전자재조합 기술에 광범위하게 이용된다. 1kb에서 1Mb의 다양한 크기로 존재하며 대부분 환형이고, 세포에서 분리한 플라스미드는 초나선형으로 존재한다. 2. DNA 추출 및 정제 방법 E.coli 세균으로부터 플라스미드를 추출하기 위해 여러 버퍼를 순차적으로 사용한다...2025.11.18
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제한효소를 이용한 DNA절단 및 전기영동 실험2025.11.131. 제한효소와 DNA절단 제한효소는 특정한 염기서열을 인식하여 DNA를 절단하는 효소이다. 실험에서 사용된 EcoR1과 HindⅢ 같은 제한효소들은 각각 다른 염기서열을 인식하여 DNA를 절단한다. 절단된 DNA의 말단 모양에 따라 blunt end(직선으로 잘린 경우)와 sticky end(ㄴ방향에서 ㄱ방향으로 꺾여서 잘린 경우)로 분류된다. 2. Sticky end와 Blunt end의 특성 Sticky end는 핵산 한가닥의 염기들이 노출되어 있어 상보적인 염기와 수소결합할 준비가 되어있다. 반면 blunt end는 직선으로...2025.11.13
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PCR 증폭 및 전기영동을 통한 DNA 분석2025.11.161. PCR 증폭 (Polymerase Chain Reaction) PCR은 DNA를 증폭하는 기술로, annealing 과정에서 primer가 target sequence와 상보적으로 결합하여 DNA 복제를 시작한다. 18~25개의 nucleotides로 구성된 primer가 사용되며, 20개 nucleotides의 경우 비표적 부위에 결합할 확률은 1/1,099,511,627,776으로 극히 낮다. 실험 결과 약 1600bp의 construct DNA가 진하게 증폭되었고, 약 1400bp의 DNA는 primer가 원하지 않는 위...2025.11.16
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대장균 배양과 형질전환, 플라스미드 DNA 분리 및 전기영동2025.11.171. 대장균 배양 및 형질전환 대장균(Escherichia coli)은 유전공학 연구에 가장 널리 사용되는 박테리아로, 약 2μm 길이에 0.8μm 폭의 크기를 가지며 약 460만 개의 염기쌍으로 이루어져 있다. 형질전환은 외부 DNA를 숙주세포 내에 넣어 새로운 유전형질을 얻게 하는 과정이다. 본 실험에서는 Competent cell에 플라스미드 DNA를 도입하기 위해 열 충격 방법을 사용했으며, 45℃에서 1분간 열충격을 주어 세포막을 불안정하게 해 플라스미드가 세포 내로 들어갈 수 있도록 했다. 형질전환된 세포는 항생제 저항성...2025.11.17
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DNA 추출 및 PCR, PCR 결과 확인(전기영동) 레포트2025.04.251. DNA 추출 DNA 추출 과정에서 Vortexing이나 Tapping을 하지 않고 Inverting하는 이유는 고분자인 gDNA에 물리적인 힘이 크게 가해져 gDNA의 손상이 일어나는 것을 방지하기 위해서이다. gDNA 전기영동 결과에서 Clean band가 나오지 않은 이유는 gDNA가 크기가 무척이나 크기 때문에 일련의 실험 과정에서 많이 부서져 부서진 조각들의 크기가 다양하여 전기영동 시 clean band가 나오지 않고 번진 형태로 나타났기 때문이다. 2. PCR PCR product의 전기영동 결과를 보면 500~60...2025.04.25
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제한효소를 이용한 플라스미드 DNA 분석 및 전기영동2025.11.121. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 DNA의 특정한 부위를 인식하여 phosphodiester bond를 절단하는 효소이다. 본 실험에서 사용된 HindIII 효소는 DNA상에서 T와 C 사이의 결합을 끊어 원형의 플라스미드 DNA를 선형 형태로 변환한다. 제한효소의 특이성에 따라 DNA의 특정 사이트를 찾아 절단하며, 이를 통해 제한효소 지도를 작성할 수 있다. 2. 아가로스 겔 전기영동(Agarose Gel Electrophoresis) DNA 조각을 분리하고 인식하는 가장 일반적인 방법으로, 간단하고 ...2025.11.12
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