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여러 가지 형질이 함께 유전될 때 - 독립의 법칙2025.11.181. 독립의 법칙 두 쌍의 대립 형질이 함께 유전되는 경우 각각의 대립 형질은 다른 형질의 영향을 받지 않고 우열의 법칙과 분리의 법칙에 따라 유전되는 현상이다. 유전자들이 연관되지 않았을 때 성립하며, 퍼네트 사각형을 통해 유전자형으로 설명할 수 있다. 어버이의 유전자형이 RRYY와 rryy일 때 잡종 제1대는 RrYy가 되고, 생식 세포는 RY, Ry, rY, ry의 네 가지가 1:1:1:1의 비로 만들어진다. 2. 완두의 두 가지 형질 유전 완두의 모양(둥근 것이 주름진 것에 대해 우성)과 색깔(황색이 녹색에 대해 우성)이 함...2025.11.18
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DNA 연결 및 형질전환 실험 예비2025.11.131. DNA Ligation (DNA 연결) DNA 연결은 DNA ligase 효소를 이용하여 두 개의 DNA 분자를 공유결합으로 연결하는 과정입니다. 제한효소로 절단된 DNA의 5' 인산기와 3' 수산기 사이의 포스포디에스터 결합을 형성하여 DNA 분자를 연결합니다. 이 과정은 재조합 DNA 기술에서 벡터와 삽입 DNA를 연결하는 데 필수적인 단계입니다. 2. Transformation (형질전환) 형질전환은 외부에서 도입된 DNA가 세포 내로 들어가 세포의 유전자형을 변화시키는 과정입니다. 박테리아의 경우 화학적 방법이나 전기천...2025.11.13
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형질전환과 블루-화이트 스크리닝 실험2025.11.171. 형질전환(Transformation) 형질전환은 외부의 DNA 또는 플라스미드가 세포에 도입되어 새로운 유전형질을 획득하는 현상입니다. 자연계에서는 세균 성장 곡선의 정체기에 주로 발생하지만, 실험실에서는 화학적 또는 물리적 처리를 통해 수용능 있는 세포(competent cell)를 만들어 효율적으로 형질전환을 수행합니다. 본 실험에서는 CaCl2 처리를 통해 TOP10 E.coli competent cell을 준비하고, heat shock 방식으로 플라스미드 DNA를 세포 내로 도입했습니다. 2. 블루-화이트 스크리닝(Bl...2025.11.17
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대장균 형질전환을 위한 Competent Cell 제조2025.11.141. Competent Cell 제조 낮은 온도에서 세포막 인지질의 유동성을 감소시키고, 염화칼슘으로 세포막의 음전하를 감소시켜 competent cell을 제조한다. 제조된 competent cell은 글리세롤에 현탁시켜 cell stock으로 보관된다. Competent cell은 외부 DNA 삽입이 용이하도록 화학적으로 처리된 대장균 세포로, 형질전환에 필요한 수용성 세포이다. 2. 형질전환 및 대장균 사용 이유 형질전환은 외부 DNA를 세포 내에 삽입하여 세포의 형질을 변환시키는 유전자 재조합 방법이다. 대장균을 사용하는 이...2025.11.14
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형질 전환 실험: 원핵 세포의 유전자 조작2025.11.141. 형질 전환(Transformation) 형질 전환은 외부에서 만들어진 plasmid를 plasmid가 없는 원핵 세포에 삽입하여 새로운 유전형질을 나타내게 하는 과정입니다. 제한효소를 이용하여 plasmid의 특정 부위를 절단하고 원하는 염기서열을 삽입합니다. Competent cell을 CaCl₂로 처리하여 외부 DNA를 쉽게 받아들일 수 있는 상태로 만들고, 42°C heat-shock과 ice bucket 처리를 통해 plasmid를 세포 내로 도입합니다. 이 과정은 인슐린 생산 등 의약품 개발에 광범위하게 활용됩니다. ...2025.11.14
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P1 박테리오파지를 이용한 형질도입 실험2025.11.111. 박테리오파지(Bacteriophage) 박테리오파지는 박테리아를 감염시키는 바이러스로, 단백질 구조로 둘러싸인 핵산 분자로 구성된다. 유전물질은 ssRNA, dsRNA, ssDNA, dsDNA 등이 원형 또는 선형으로 배열되어 있다. 박테리오파지는 머리와 꼬리로 구성되며, 약 96%는 숙주세포에 유전물질을 주입할 때 사용하는 꼬리를 가지고 있다. 독성파지와 온건성 파지로 구분되며, 용균성 생활사(lytic cycle)와 용원성 생활사(lysogenic cycle)를 거친다. 2. P1 박테리오파지 P1은 대장균과 일부 박테리아...2025.11.11
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RNA 준비 및 cDNA 합성: 형질도입 방법론2025.11.141. 형질도입(Transfection) 형질도입은 바이러스의 핵산이나 플라스미드 벡터를 정제하여 진핵세포 내에 도입하는 과정이다. 원핵세포에 도입될 경우는 형질전환(transformation)이라 한다. 세포막의 인지질 이중층은 인산기로 인해 음전하를 띠고 있으며, 핵산도 음전하를 가지고 있어 자발적 도입이 어렵다. 따라서 화학적, 물리적, 생물학적 방법을 이용하여 세포막을 통과시킨다. 2. 화학적 형질도입 방법(Reagent-based Method) 화학적 방법으로는 양이온성 지질(cationic lipids), 인산칼슘(calc...2025.11.14
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DNA 기술을 이용한 형질전환 및 PCR 실험2025.11.171. DNA 클로닝 및 형질전환(Transformation) DNA 클로닝은 DNA를 재조합하고 숙주 안에서 복제하는 과정이다. 대장균 형질전환을 위해 competent cell을 준비하고 플라스미드를 도입한 후 열충격(heat shock)을 가한다. X-gal/IPTG가 포함된 고체배지에서 배양하면 형질전환된 세포는 흰색 colony를, 형질전환되지 않은 세포는 파란색 colony를 형성한다. 이는 LacZ 유전자의 발현 여부에 따른 결과로, 외부 DNA가 삽입되면 LacZ 발현이 억제되어 β-galactosidase가 생성되지 ...2025.11.17
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식물 유전체 DNA 추출 및 형질전환 식물 선별2025.11.121. 식물 유전체 DNA 추출 식물 세포로부터 유전체 DNA를 분리하고 정제하는 과정입니다. 식물 조직을 분쇄하여 세포벽을 파괴한 후, 적절한 완충액과 효소를 사용하여 DNA를 추출합니다. 추출된 DNA는 에탄올 침전을 통해 정제되며, 최종적으로 고순도의 유전체 DNA를 얻을 수 있습니다. 이는 분자생물학 실험의 기초가 되는 중요한 기술입니다. 2. T-DNA 유전형 분석 T-DNA는 아그로박테리움 투메파시엔스에서 식물 세포로 전달되는 DNA 영역입니다. T-DNA 유전형 분석은 PCR 기법을 이용하여 형질전환 식물에 T-DNA가 ...2025.11.12
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현대생물학실험2: 형질전환, PCR, 전기영동2025.11.171. 형질전환(Transformation)과 Competent Cell 형질전환은 외부 DNA가 세포 내부로 들어와 세포의 형질이 바뀌는 현상이다. Competent cell은 외부 DNA를 받아들일 수 있는 상태의 박테리아 세포로, CaCl2 처리와 열충격을 통해 인위적으로 제조된다. DH5α 대장균을 사용하여 log phase(OD600=0.4~0.6)에서 CaCl2와 glycerol로 처리하면 형질전환 효율이 10^9 CFU/μg에 도달한다. 형질전환 효율은 (CFU on plate/pg DNA) × 10^6 × (total ...2025.11.17
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