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GFP 단백질과 단백질 정량(Protein Measurements)2025.01.221. 단백질 정량 단백질 정량 방법 중 Lowry assay와 Extinction coefficient assay를 통해 단백질을 정량하고, 비교하는 과정에서 흡광도와 표준곡선의 의미를 이해하고자 수행한 실험이다. 단백질은 아미노산의 중합체로, 아미노산 사이에 펩타이드 결합이 반복되며 단백질이 형성된다. 이번 실험에서 사용한 단백질의 농도를 정량하는 방법은 특정 아미노산 또는 단백질의 흡광도를 이용하는 Extinction coefficient assay와 표준곡선식과 750 nm에서의 흡광도를 이용하는 Lowry assay이다. 2...2025.01.22
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SDS-PAGE를 이용한 AP 단백질 분석 및 Coomassie Blue Staining2025.01.171. SDS-PAGE를 이용한 단백질 분석 SDS-PAGE 실험을 통해 AP 단백질의 크기와 순도를 확인할 수 있었습니다. SDS-PAGE 과정에서 단백질의 3차 구조를 제거하고 크기에 따라 분리되도록 하여, 목표 단백질인 AP 단백질을 선별적으로 확인할 수 있었습니다. 또한 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질 밴드를 시각화하여 분석할 수 있었습니다. 2. 단백질 정제 과정 단백질 정제 과정에서 target 단백질 이외의 비특이적으로 결합한 단백질들이 씻겨나가면서 target 단백질의 순도가 높아지는 것을 확인할 수 있었...2025.01.17
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 7주차 Peptide Mass Finger-Printing2025.05.041. MALDI-TOF 질량분석법 MALDI-TOF 질량분석법은 고분자 물질에 대해 시료의 분해 없이 기화/이온화가 가능한 방법으로, 일반적으로 질량이 크고 열에 불안정한 생체 고분자나 합성 고분자에 이상적으로 적용할 수 있다. 이 실험에서는 MALDI 이온화 장치와 TOF 질량 분석기를 이용하여 단백질을 동정하는 방법을 공부한다. 2. 단백질 동정 MALDI-TOF 질량분석법을 이용하여 단백질을 동정하는 과정을 설명한다. 시료를 MALDI 장치에 주입하고 질량 분석기로 분석한 후, 결과 스펙트럼을 데이터 검색 엔진에 입력하여 단백...2025.05.04
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생화학 5단원 단백질의 정제 요약정리2025.04.301. 단백질 정제의 중요성 세포 내에서 일어나는 많은 활동들은 단백질에 의해 수행된다. 따라서 단백질이 생체 내에서 어떤 기능을 하는지 아는 것은 생명활동을 이해하는데 매우 중요하다. 단백질의 아미노산 서열은 단백질의 3차 구조를 결정하고, 이 구조가 상호작용하여 4차 구조를 만든다. 즉 폴리펩타이드의 서열이 전체 구조를 결정하고, 단백질의 고유한 구조는 단백질의 기능을 결정한다. 따라서 이들 간의 관계는 매우 중요하다. 단백질의 구조를 알고, 서열을 구하고 그 기능을 알기 위해서는 반드시 순수한 단백질이 필요하다. 따라서 단백질의...2025.04.30
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[생화학실험]단백질 정량(Lowry 법)2025.05.041. 단백질 정량(Lowry법) Lowry법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu^{2+} 이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. Cu^{2+} 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원시켜 강한 푸른색을 생성한다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01～1.0㎎/㎖의 경우에 측정 가능하다. 2. Biuret 반응 두 개 이상의 펩티드 결합을 갖는 화합물들은 알칼리성 용액에서 황산구리로 처리하면...2025.05.04
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생체분자의 정성분석2025.05.071. 탄수화물 탄수화물은 탄소, 수소, 산소로 이루어져 주로 Cn(H2O)m 의 구조를 가진다. 자연에서 가장 많이 발견되는 분자이며, 에너지 저장 및 수송, 생체의 모양이나 형태를 부여하는 구조 분자로서의 기능, 생체반응을 촉발하는 인식분자 또는 신호 분자로서의 기능 등을 수행한다. 탄수화물은 단당류, 이당류, 올리고당류, 다당류로 분류된다. 2. 단백질 단백질은 아미노산으로 구성되어 있으며, 다양한 기관과 효소, 호르몬 등을 이루는 주요한 성분이다. 주로 인체 구성에 사용되지만, 드물게 에너지원으로도 사용된다. 단백질의 크기, ...2025.05.07
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단백질 정량법 비교(BCA, Bradford)2025.01.271. 단백질 정량법 본 실험은 BCA Assay와 Bradford Assay를 이용하여 미지시료의 단백질 농도를 추정하고 어떤 방법이 단백질 정량에 더 적절한 방법인지 비교 분석하고자 하였다. BCA Assay 결과 미지시료의 농도는 711μg/mL, Bradford Assay 결과 1705μg/mL로 추정되었다. 표준곡선의 결정계수(R2)는 Bradford Assay가 0.9283으로 BCA Assay의 0.9094보다 약간 더 높아 신뢰성이 있는 것으로 나타났다. 그러나 국립과학원의 분석기준에 따르면 습식분석의 경우 R2가 0....2025.01.27
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세포 용해를 통한 단백질 추출2025.01.021. 세포 용해 방법 세포 용해(또는 세포 파괴)에 사용되는 다양한 물리적, 화학적 방법을 살펴보고, RIPA 용해 완충액을 사용하여 세포를 파괴하고 세포 단백질을 얻을 수 있다. RIPA 용해 완충액은 세포막, 핵막, 단백질 결합을 모두 분해할 수 있는 강한 계면활성제를 포함하고 있어 세포질, 핵 단백질 등 다양한 단백질을 추출할 수 있다. 2. 단백질 추출 과정 배양 중인 MCF-7 세포를 DPBS로 세척하고 세포 긁개로 세포를 모아 원심분리하여 세포 펠릿을 얻었다. 이 세포 펠릿에 RIPA 용해 완충액을 처리하여 세포를 용해하...2025.01.02
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단백질 검출2025.04.281. 단백질 검출 단백질은 탄수화물, 지질과 함께 생물체에 다량으로 포함되어 있으며, 세포의 지지, 운동, 물질 운송 기수를 구성하고 항체나 호르몬, 세포 생장 조절에 대한 분자로 활동하기 때문에 생명현상에 매우 중요하다. 이번 실험에서는 단백질을 검출하는 대표적인 방법 중 Biuret method를 이용하여 peptide 결합의 유무에 따라 검출이 가능한지 확인하였다. 2. 뷰렛 반응 (Biuret method) 뷰렛 반응 (Biuret method)은 2개 이상의 peptide 결합을 갖는 화합물, 즉 단백질이나 짧은 폴리 펩타...2025.04.28
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임상화학 및 실험 레포트_ 지질(실험방법, 결과, 이론, 레퍼런스 등)2025.05.141. 전기영동 전기영동은 전기장 아래에서 용액 속의 전하가 반대 전하의 전극을 향하여 이동하는 화학 현상으로, 전하량, 크기, 분자량, 전기장, 완충액, 지지체 등의 요인에 영향을 받는다. 전기영동을 통해 혈청 단백질을 분리하여 알부민, 알파1-글로불린, 알파2-글로불린, 베타-글로불린, 감마-글로불린 등의 다양한 단백질을 관찰할 수 있다. 2. 혈청 단백질 혈청 단백질에는 알부민, 알파1-글로불린, 알파2-글로불린, 베타-글로불린, 감마-글로불린이 있다. 알부민은 혈장 단백질의 주요 성분으로 다양한 기능을 수행하며, 다른 단백질들...2025.05.14
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