총 114개
-
미니프렙을 통한 플라스미드 DNA 분리 및 정량2025.11.161. 미니프렙(Minipreparation) 방법 E. coli에 형질전환된 플라스미드를 미니프렙 방법으로 분리하는 실험이다. Solution I(glucose, Tris-Cl, EDTA)에서 세포 용해 준비, Solution II(SDS, NaOH)에서 세포 용해 및 DNA 변성, Solution III(potassium acetate, glacial acetic acid)에서 중화 과정을 거친다. 최종 DNA 농도는 0.2322 µg/µl이었다. 효율 향상을 위해 bacterial pellet 제거, inverting으로 혼합,...2025.11.16
-
대장균 배양과 형질전환, 플라스미드 DNA 분리 및 전기영동2025.11.171. 대장균 배양 및 형질전환 대장균(Escherichia coli)은 유전공학 연구에 가장 널리 사용되는 박테리아로, 약 2μm 길이에 0.8μm 폭의 크기를 가지며 약 460만 개의 염기쌍으로 이루어져 있다. 형질전환은 외부 DNA를 숙주세포 내에 넣어 새로운 유전형질을 얻게 하는 과정이다. 본 실험에서는 Competent cell에 플라스미드 DNA를 도입하기 위해 열 충격 방법을 사용했으며, 45℃에서 1분간 열충격을 주어 세포막을 불안정하게 해 플라스미드가 세포 내로 들어갈 수 있도록 했다. 형질전환된 세포는 항생제 저항성...2025.11.17
-
플라스미드 DNA 추출 및 분석 실험 보고서2025.11.171. 플라스미드 플라스미드는 세균의 세포 내에 복제되어 독자적으로 증식할 수 있는 염색체 이외의 DNA 분자이다. 세균의 생존에 필수적이지는 않으며 비교적 크기가 작고 세포 상호간에 전달이 잘 된다. 복제 원점을 가지고 있어 복제가 가능하며 유전자가 있다면 정상적으로 발현된다. 접합 과정이나 직접 세포막을 통해 다른 세균에게 전달될 수 있어 세균의 유전적 다양성을 높여준다. 2. 플라스미드 추출 원리 플라스미드 추출은 플라스미드를 제외한 세균의 다른 부분을 제거하는 것으로, 특히 플라스미드와 염색체 DNA를 분리하는 것이 중요하다....2025.11.17
-
일반생물학실험 결과레포트 [실험8] 대장균에서 플라스미드 DNA 소량 분리2025.05.131. S1, S2, S3 buffer 성분 및 역할 S1 buffer(재부유, Resuspension buffer)에는 EDTA, RNase, glucose, Tris-Cl이 포함되어 있으며, 이들은 세포벽 파괴, RNA 분해 촉진, 삼투압 유지, pH 유지 등의 역할을 한다. S2 buffer(용해, Lysis buffer)에는 도데실황산나트륨(SDS)과 수산화 나트륨이 포함되어 있으며, 이들은 세포막 분해, DNA와 RNA 변성, 단백질 제거 등의 역할을 한다. S3 buffer(중화, Neutralization buffer)에...2025.05.13
-
제한효소를 이용한 플라스미드 DNA 분석 및 전기영동2025.11.121. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 DNA의 특정한 부위를 인식하여 phosphodiester bond를 절단하는 효소이다. 본 실험에서 사용된 HindIII 효소는 DNA상에서 T와 C 사이의 결합을 끊어 원형의 플라스미드 DNA를 선형 형태로 변환한다. 제한효소의 특이성에 따라 DNA의 특정 사이트를 찾아 절단하며, 이를 통해 제한효소 지도를 작성할 수 있다. 2. 아가로스 겔 전기영동(Agarose Gel Electrophoresis) DNA 조각을 분리하고 인식하는 가장 일반적인 방법으로, 간단하고 ...2025.11.12
-
DNA 연결 및 형질전환, 플라스미드 추출 및 제한효소 절단2025.11.171. T4 DNA Ligase와 DNA 연결(Ligation) T4 DNA ligase는 T4 박테리오파지에서 유래한 효소로, DNA의 3'-OH와 5'-P 사이에 phosphodiester 결합을 형성하여 DNA를 연결한다. Ligation buffer에는 Tris-HCl(pH 7.6), MgCl2, DTT, ATP가 포함되며, 각각 완충작용, cofactor 제공, 환원환경 조성, cofactor 제공의 역할을 한다. Self-ligation 방지를 위해 double-digestion(서로 다른 제한효소 사용) 또는 alkali...2025.11.17
-
[A+] 연세대학교 생화학실험(2) 3주차 Plasmid and Plasmid DNA preparation2025.05.121. Plasmid and Plasmid DNA preparation 이 자료는 플라스미드와 플라스미드 DNA 준비에 대한 내용을 다루고 있습니다. 플라스미드는 세포 염색체와는 별도로 존재하는 자기 복제 DNA 분자로, 다양한 클로닝 사이트를 가지고 있습니다. 플라스미드 DNA 추출 과정에서는 세포벽 용해, 세포막 파괴, 염색체 DNA와 플라스미드 DNA 분리 등의 단계를 거치게 됩니다. 이를 통해 순수한 플라스미드 DNA를 얻을 수 있습니다. 1. Plasmid and Plasmid DNA preparation Plasmids a...2025.05.12
-
[생화학실험] (A+) Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis2025.05.031. DNA DNA(Deoxyribo Nucleic Acid)는 뉴클레오타이드의 중합체인 두 개의 긴 가닥이 서로 꼬여있는 이중나선 구조로 되어있는 고분자화합물이다. DNA는 4종류의 뉴클레오타이드가 중합 과정을 통해 연결된 가닥으로 이루어져 있으며, 이 가닥은 Cytosine, Guanine, Adenine, Thymine은 독특한 핵염기(nucleobase)로 구분되기 때문에 흔히 DNA 염기서열이라고 부른다. DNA 염기서열은 유전정보를 나타내는 유전자 구간과 그렇지 않은 비부호화 DNA 구간으로 나눌 수 있다. 2. 재조합 ...2025.05.03
-
아주대 생실1) Plasmid DNA 추출 보고서2025.05.101. 플라스미드 DNA 추출 이 실험을 통해 플라스미드 DNA를 추출하고 전기영동을 통해 플라스미드 DNA의 형태를 관찰할 수 있었습니다. 플라스미드는 생장에 필수적인 염색체 DNA와 물리적으로 분리되어 있는 대표적인 에피솜 DNA 분자로, E.coli 세균에서 플라스미드를 추출하여 DNA를 관찰했습니다. 실험에서는 여러 가지 버퍼를 사용했는데, 이는 플라스미드 DNA 추출을 위한 것입니다. 실험 결과 3kb와 10kb 부분에서 플라스미드 DNA가 관찰되었으며, 3kb 부분은 Linear DNA, 10kb 부분은 Open-circu...2025.05.10
-
아주대 생명과학실험 Plasmid DNA 추출2025.01.131. 플라스미드 DNA 플라스미드 DNA는 원핵세포의 세포질 및 진핵생물의 세포 소기관에서 발견되는 작고 원형의 이중 가닥 DNA 분자이다. 이 DNA 조각들은 자율적으로 복제할 수 있으며, 세포의 염색체 DNA와는 독립적으로 존재한다. 플라스미드는 보통 추가적인 유전 정보를 포함하고 있으며, 특정 환경 조건에서 숙주 세포에 유익할 수 있는 기능들을 부여한다. 2. 제한효소 제한효소(EcoRI)는 플라스미드 DNA를 실험실에서 조작하기 위한 주요 도구이다. 이 효소는 특정 짧은 DNA 서열을 인식하고 절단할 수 있는 능력이 있어, ...2025.01.13
2 / 12
