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단백질의 정량실험 Lowry method2025.01.201. 단백질 정량 단백질 정량은 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정이다. 단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 단백질의 본질, 시료에 있는 다른 성분들의 특성, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라 적당한 방법을 선택해야 한다. Lowry 법은 Biuret 반응과 Folin-Ciocalteu 반응을 이용하여 단백질을 정량하는 방법으로, 감도가 비교적 넓고 오랫동안 광범위하게 이용되고 있다. 2. Lowry 법 Lowry 법은 알칼리성 용액에서 단백질의 펩티드 결합과 구리...2025.01.20
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[A+ 보장!] 연세대 의대 의예과 1학년 General Biology 실험 레포트 Protein quantificaiton2025.01.141. 단백질 구조와 기능 단백질은 생체 내에서 다양한 기능을 수행하며, 아미노산으로 구성되어 있다. 단백질의 1차 구조는 아미노산이 펩타이드 결합으로 연결된 폴리펩타이드의 사슬이며, 2차 구조는 폴리펩타이드의 펩타이드 결합 사이의 수소 결합으로 인해 형성되는 α 나선구조와 β 병풍구조를 의미한다. 단백질의 3차 구조는 폴리펩타이드의 3차원 형태를 의미하며, 곁사슬 사이의 다양한 결합이 이를 결정한다. 마지막으로 단백질의 4차 구조는 두 개 이상의 폴리펩타이드로 구성된다. 2. Bradford assay Bradford assay는 ...2025.01.14
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Bradford법을 이용한 단백질의 정량 분석2025.01.151. 단백질 정량 분석 실험 목적은 Bradford법을 이용하여 단백질 정량을 하고 Standard curve를 그리는 것입니다. Bradford법은 산성용액에서 Coomassie brilliant blue 염료가 단백질과 결합하여 최대 흡광도가 595 ㎚로 이동하는 원리를 이용합니다. 따라서 595 ㎚에서의 흡광도가 단백질 농도와 비례합니다. 이 방법은 빠르고 비단백질성분들에 의한 방해도 거의 없어 실험실에서 가장 자주 사용하는 단백질 정량법입니다. 2. 단백질 정량의 중요성 단백질 정량은 생화학 실험에서 기본이 되는 과정입니다....2025.01.15
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생명과학에서의 흡광도 측정 (비어-램버르트 법칙, 단백질, DNA 정량)2025.05.091. 흡광도와 Beer-Lambert's law (비어-램버르트 법칙) 흡광도(absorbance)는 물질이 특정 파장의 복사선을 얼마나 잘 흡수하는지를 나타내는 척도이다. Beer-Lambert 법칙은 흡광도와 시료의 몰농도, 빛이 물질을 통과하는 길이의 관계를 설명한다. 이에 따르면 흡광도는 빛이 물질을 통과하는 길이와 시료의 몰농도에 비례한다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 빛을 쬐어주어 물질의 에너지 상태를 변화시키고, 이를 통해 물질의 정성 및 정량 분석을 수행하는 방법이다. 자외선-가시광선 분광광도계를 이용하여 20...2025.05.09
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단백질 정제2025.01.231. 재조합 단백질 발현 재조합 단백질 기법은 정제하려고 하는 단백질의 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입한 후, 이 플라스미드 벡터를 다시 세포에 도입하면 그 세포가 도입된 외부 유전자를 마치 원래 자기가 가지고 있던 유전자인 것처럼 발현을 하는 방법이다. 이번 단백질 정제실험에서 사용하는 플라스미드인 pET28a Vector는 kanamycin이라는 항생제에 대한 저항성을 부여하는 유전자인 KanR을 갖고 있어, 배양액에 kanamycin 항생제를 넣어놓고 그곳에 대장균을 넣으면 KanR을 갖고 있는 플라스미드인 pET28a Vec...2025.01.23
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GFP 단백질과 단백질 정량(Protein Measurements)2025.01.221. 단백질 정량 단백질 정량 방법 중 Lowry assay와 Extinction coefficient assay를 통해 단백질을 정량하고, 비교하는 과정에서 흡광도와 표준곡선의 의미를 이해하고자 수행한 실험이다. 단백질은 아미노산의 중합체로, 아미노산 사이에 펩타이드 결합이 반복되며 단백질이 형성된다. 이번 실험에서 사용한 단백질의 농도를 정량하는 방법은 특정 아미노산 또는 단백질의 흡광도를 이용하는 Extinction coefficient assay와 표준곡선식과 750 nm에서의 흡광도를 이용하는 Lowry assay이다. 2...2025.01.22
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SDS-PAGE and Protein Analysis2025.01.211. SDS의 역할 및 SDS-PAGE 원리 SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)는 계면활성제로서 친수성과 소수성 부분을 모두 지니고 있으며, 단백질을 변성할 수 있는 물질이다. SDS-PAGE는 이러한 SDS의 특성을 토대로 하여 단백질을 분자량에 따라 band 형태로 분리하는 실험이다. 단백질은 그 구조와 전하, 분자량이 모두 다르기 때문에 SDS를 통해 단백질의 구조와 전하를 모두 일정하게 한 뒤 분자량에 의해서만 분석을 진행한다. 2. Gel에 들어가는 시료의 역할 Acrylamide와 N,N'-Methylene...2025.01.21
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량2025.01.231. 단백질 정량 이 실험의 목적은 Lowry-Folin법을 이용하여 수용액에 녹아있는 단백질을 정량하고 흡광도 그래프를 그리는 방법을 익히는 것입니다. 실험 방법에는 BSA 표준곡선 작성, 미지의 단백질 시료 측정, 흡광도 측정 및 분석 등의 단계가 포함되어 있습니다. 2. Lowry-Folin법 Lowry-Folin법은 단백질 정량에 널리 사용되는 방법으로, 구리 이온과 단백질의 반응을 통해 청색 발색 반응이 일어나는 원리를 이용합니다. 이 실험에서는 BSA 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하고, 미지의 단백질 시료의 농도를 ...2025.01.23
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량 (생화학 실험)2025.01.161. 단백질 정량 실험 목적은 Lowry 방법으로 수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 정량하는 것입니다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득합니다. Lowry 단백질 분석법은 강알칼리 조건에서 구리 이온과 펩타이드 결합의 반응, 그리고 Folin-Ciocalteu 시약과의 반응을 통해 단백질을 정량합니다. 이 방법은 트립토판, 시스테인, 티로신 등의 아미노산과 반응하여 발색되는 원리를 이용합니다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 의한 빛의 흡수 현상을 이용하여 화학물질의 양을 정량하는 방법입니다. ...2025.01.16
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[약학실습 A+] 단백질 분리 정제 결과레포트2025.01.181. 단백질 분리 정제 본 실험에서는 Size Exclusion Chromatography 기법을 이용하여 BSA와 Lysozyme으로 구성된 단백질 혼합 샘플을 분리 정제하였다. FPLC 장비를 사용하여 분리된 단백질 분획을 수집하고, UV spectroscopy를 통해 각 분획의 농도를 측정하여 수득률을 계산하였다. 실험 결과, BSA의 수득률은 24%, Lysozyme의 수득률은 16.16%로 나타났다. 이는 일반적으로 기대되는 90% 이상의 수득률에 크게 미치지 못하는 수준으로, 시간이 지나면서 단백질 구조가 분해되었기 때문...2025.01.18
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