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DNA cloning 방법/enzyme, transformation, selection mark/생화학 보고서2025.01.201. DNA cloning 방법 DNA cloning은 타깃 유전자를 박테리아의 게놈에서 잘라내어 plasmid에 삽입하는 과정입니다. 이 과정에서 restriction enzyme을 사용하여 유전자를 자르고, ligase를 사용하여 유전자를 plasmid에 붙입니다. 이렇게 만들어진 recombinant vector는 박테리아에 형질전환되어 증폭됩니다. 형질전환 과정에서는 열처리를 통해 세포막을 열어 plasmid가 들어가게 하며, 항생제 내성 유전자를 선별 마커로 사용하여 형질전환된 세포를 선별합니다. 2. Enzyme 사용 D...2025.01.20
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DNA Ligation 실험 결과 및 이론 분석2025.11.141. DNA Ligation의 원리 및 과정 Ligation은 DNA나 RNA의 말단을 연결하는 과정으로, 재조합 DNA를 만들기 위해 Insert DNA 단편과 vector를 연결한다. 제한효소로 DNA를 자르면 상보적인 말단이 생성되며, ligase 효소가 수소결합을 더 강한 공유결합으로 전환하여 두 DNA 가닥을 연결한다. 제한효소는 가위 역할, ligase는 풀 역할을 수행한다. 2. Ligation에 영향을 미치는 요인 DNA 농도, ligase 농도, 온도, buffer 구성이 ligation 효율에 영향을 미친다. DN...2025.11.14
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제한효소 처리 실험 및 DNA 절단 분석2025.11.161. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 특정 DNA 염기서열을 인식하여 DNA를 절단하는 효소이다. 실험에서 사용된 HindⅢ와 Eco RⅠ은 각각 λ DNA를 다른 위치에서 절단한다. HindⅢ는 DNA를 5번 절단하여 6개의 segments를 생성하고, Eco RⅠ은 4번 절단하여 5개의 segments를 생성한다. 제한효소는 sticky end(상보적 단일가닥)를 만들어 유전자 클로닝에 활용된다. 2. 전기영동(Gel Electrophoresis) 전기영동은 절단된 DNA fragments를 크기별로 분리...2025.11.16
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Gel extraction & TA cloning 실험 보고서2025.11.171. Gel Extraction Agarose gel 전기영동으로 확인한 PCR product를 gel 상에서 분리 및 정제하는 기술이다. FADF buffer를 이용해 gel을 용해한 후, silica membrane을 가진 column에 DNA를 결합시키고 wash buffer로 불순물을 제거한 후 ddH2O로 elution하는 과정으로 진행된다. Chaotropic salt가 포함된 FADF buffer는 silica membrane의 O-와 DNA의 인산기 사이에 cation bridge를 형성하여 DNA 부착을 가능하게 한...2025.11.17
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Ligation & Transformation 예비레포트2025.11.151. DNA Ligation (DNA 연결) 유전자 클로닝 과정에서 DNA ligase 효소를 이용하여 insert DNA와 vector DNA를 연결하는 실험. 제한효소로 처리된 DNA 말단을 DNA ligase 효소로 연결하여 재조합 DNA를 만드는 과정. 50ng의 vector DNA에 대해 1:1, 1:5, 1:10 등의 비율로 insert DNA를 혼합하고, 37℃에서 1시간 반응시켜 DNA 연결을 수행한다. 2. Bacterial Transformation (박테리아 형질전환) 재조합 DNA를 대장균(CP cell)에 도...2025.11.15
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DNA 연결 및 형질전환, 플라스미드 추출 및 제한효소 절단2025.11.171. T4 DNA Ligase와 DNA 연결(Ligation) T4 DNA ligase는 T4 박테리오파지에서 유래한 효소로, DNA의 3'-OH와 5'-P 사이에 phosphodiester 결합을 형성하여 DNA를 연결한다. Ligation buffer에는 Tris-HCl(pH 7.6), MgCl2, DTT, ATP가 포함되며, 각각 완충작용, cofactor 제공, 환원환경 조성, cofactor 제공의 역할을 한다. Self-ligation 방지를 위해 double-digestion(서로 다른 제한효소 사용) 또는 alkali...2025.11.17
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DNA ligation, Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA2025.01.221. DNA ligation DNA ligation은 T4 DNA ligase 효소를 이용하여 DNA 말단을 phosphodiester 결합으로 연결하는 과정이다. 이 과정에서 vector와 insert의 ligation, vector의 self-ligation, insert의 self-ligation 등 세 가지 형태가 나타날 수 있다. 본 실험에서는 HindⅢ와 NdeⅠ로 double-digestion한 vector와 insert를 T4 DNA ligase로 ligation하였다. 2. Transformation ligation...2025.01.22
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재조합 플라스미드 DNA 클로닝 예비2025.05.011. 플라스미드 DNA 플라스미드는 주 염색체와 분리되어 있어 독자적으로 복제가 가능한 환형 DNA이다. 대부분은 세균에 존재하며 생존에 필수적이진 않지만 특정 상황에 유용한 유전자를 포함한다. 플라스미드는 클로닝 벡터로 많이 이용되며 재조합된 플라스미드를 세균에 유입 후 증식시켜 DNA양을 늘린다. 또는 발현벡터로 세포내의 전사,번역기구를 이용해 재조합 유전자를 발현시켜 단백질을 대량 생산시킬 때도 이용 가능하다. 2. 클로닝 생명공학에서 cloning은 세포나 DNA조각을 복제하는 과정이다. 목적DNA조각을 다량 생산하거나 DN...2025.05.01
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[화공생물공학실험]DNA 제한효소2025.04.281. 제한효소 제한효소는 핵산의 분해요소 중 하나로 DNA의 특정 염기배열을 식별하고 2중 사슬을 절단하는 endonuclease이다. 유전공학 분야에서 재조합 DNA를 만들기 위해 사용되는 효소이다. 제한효소는 소단위체의 구성형태, 절단 위치, 절단 서열의 특이성 및 효소의 구성에 따라 3가지 형으로 분류할 수 있다. 제한효소가 DNA를 절단하는 부위는 두 종류로 분류 가능하다. 하나는 점착성 말단, 다른 하나는 비점착성 말단이다. 점착성 말단은 잘린 부위가 돌출되어 있는 부분이 있는 말단을 말하고 비점착성 말단은 돌출부위가 없는...2025.04.28
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[A+ 리포트] Ligation & Transformation (분자생물학실험)2025.04.251. Ligation 실험에서는 Vector와 PCR 산물을 Ligation하는 과정을 수행하였습니다. Ligation 시 주의사항으로는 T4 Ligase를 ice에 보관하며 가장 마지막에 첨가하고, 강한 충격을 피하는 것 등이 있습니다. 2. Transformation Transformation 과정에서는 Competent cell(E.coli)에 Ligation 산물을 처리하고 Heat-shock을 주었습니다. Competent cell은 온도에 매우 민감하므로 실험 중 ice 상태를 유지하는 것이 중요합니다. 실험 결과 일부 ...2025.04.25
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