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Agarose gel 제작 및 DNA 전기영동 실험2025.11.181. DNA 전기영동(Electrophoresis) DNA 전기영동은 DNA가 음전하를 띠고 전기장에서 양극으로 이동하는 원리를 이용한 분석 기법이다. Agarose gel 매질에서 DNA는 크기에 따라 다른 속도로 이동하여 분리된다. TAE buffer를 사용하며, Tris는 양이온을 공급하고 Acetate는 pH를 조절하며 EDTA는 DNase를 억제한다. DNA의 이동속도는 크기, 형태, gel 농도, 전압, buffer 성분에 영향을 받는다. 2. Agarose gel 제작 1% Agarose gel은 1X TAE 용액 35...2025.11.18
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단백질 분리 및 전기영동2025.01.121. Lysis buffer Lysis buffer는 세포 화합물을 분석을 위해 개방형 세포를 파괴할 때 사용되는 완충액이다. 대부분의 용해 완충액은 용해물의 산도 및 삼투압을 조절하기 위해 염(NaCl)을 함유한다. 때로는 세제(Triton X-100 또는 SDS)를 첨가하여 막 구조를 해체할 수도 있다. 또한 용해 완충액은 동물과 식물의 조직 세포 모두에서 사용할 수 있다. 2. Bradford assay Bradford assay 단백질 정량(시료 내에 포함된 단백질 양, 농도를 구하는 과정)법 중 하나로 UV-Visible ...2025.01.12
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[생화학실험] A+, PCR 및 agarose gel 전기영동 실험2025.01.071. PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR은 원하는 DNA band만을 증폭 가능하며, 이때 DNA polymerase가 사용된다. 30-40 cycle 정도 반복하여 증폭하고자 하는 표적 DNA의 한 DNA 사슬 3'말단에 상보적인 것과 그 반대 사슬의 3'말단에 상보적인 2개의 특정 올리고데옥시뉴클레오티드를 합성하고, 이를 원하는 절편을 함유한 변성된 한 가닥의 표적 DNA와 혼성화 반응 시킨다. DNA polymerase는 Taq DNA polymerase를 사용하며, 이는 열에 안정성이 있는 DNA...2025.01.07
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생화학실험 DNA추출, PCR, Gel전기영동2025.05.061. Genomic DNA Genomic DNA는 핵 내에 존재하는 유기체 내의 chromosomal DNA이며 플라스미드와 같은 염색체 외 DNA와 대조적으로 염색체 DNA이다. A, T, G, C의 염기쌍들이 유전정보를 저장하며 사람의 경우에는 32억 개 이상의 염기쌍을 갖는다. 대부분의 유기체는 모든 세포에서 동일한 유전체 DNA를 가지고 있다. 2. B16F10 cell B16F10 세포는 인간 피부암의 모델로 연구에 사용되는 종양 세포주이다. B16 세포는 전이 및 고체 종양 형성 연구에 유용한 모델이며 전이 연구를 위한 ...2025.05.06
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PCR 산물 정제 실험 예비 레포트2025.11.151. PCR 산물 정제 원리 작은 DNA 조각을 정제하는 원리를 이해하고 정제 방법을 숙지하는 것을 목적으로 한다. Column을 이용한 DNA 정제 방법을 사용하여 PCR product를 정제한다. 이 과정에서 Gel & PCR purification system kit을 활용하며, 제조사의 protocol을 따른다. 정제된 DNA는 Agarose Gel 전기영동으로 농도를 확인하고 4℃에서 보관한다. 2. Column을 이용한 DNA 정제 방법 Spin column을 이용한 DNA 정제 과정은 다음과 같다. 정제할 DNA를 포함...2025.11.15
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겔 전기영동 (agarose gel electrophoresis) 실험 리포트2025.01.141. Agarose gel electrophoresis Agarose gel electrophoresis은 크기에 따라 핵산(DNA 또는 RNA) 조각을 분리하는 데 사용되는 전기영동 종류이다. 음전하를 띤 DNA/RNA는 전류가 가해질 때 agarose gel의 기공을 통해 gel의 양전하 말단으로 이동하고 이때 더 작은 조각이 더 빠르게 이동한다. 결과 밴드는 자외선(UV)을 사용하여 시각화할 수 있다. 2. Taq polymerase Taq polymerase는 호열성 박테리아인 Thermus aquaticus에서 추출한 열 ...2025.01.14
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Gel extraction & TA cloning 실험 보고서2025.11.171. Gel Extraction Agarose gel 전기영동으로 확인한 PCR product를 gel 상에서 분리 및 정제하는 기술이다. FADF buffer를 이용해 gel을 용해한 후, silica membrane을 가진 column에 DNA를 결합시키고 wash buffer로 불순물을 제거한 후 ddH2O로 elution하는 과정으로 진행된다. Chaotropic salt가 포함된 FADF buffer는 silica membrane의 O-와 DNA의 인산기 사이에 cation bridge를 형성하여 DNA 부착을 가능하게 한...2025.11.17
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전기영동 결과보고서2025.01.121. 전기영동 전기영동은 DNA, RNA, 단백질 등의 생물학적 거대분자를 분리하는 데 사용되는 기술입니다. 이번 실험에서는 Agarose gel을 사용하여 PCR 증폭 산물을 전기영동으로 분리하였습니다. 전기영동 과정에서 주의해야 할 점으로는 TAE 완충액의 적절한 양 유지, 전기영동 시간 관리, 시료 주입 시 gel 판 손상 방지 등이 있습니다. 또한 Polyacrylamide gel을 사용하는 실험도 있으며, 이는 단백질 분리나 작은 크기의 DNA 분리에 주로 사용됩니다. 2. PCR PCR(Polymerase Chain Re...2025.01.12
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Gel 제조 (SDS-PAGE 실험을 위한 사전 준비) 보고서2025.01.131. 전기영동 전기영동은 DNA와 단백질과 같은 생체 고분자들을 분리 및 정제하는 방법입니다. 전기영동 원리는 음전하를 띄고 있는 생체고분자(DNA/단백질)들에게 전기적 힘(-음전하 ->＋양전하)을 가해주어, 물질이 사이즈에 따라 분리되는 것입니다. DNA 전기영동과 단백질 전기영동(SDS-PAGE)의 차이는 DNA는 음전하를 띄고 있어 Agarose(한천) Gel에서 관찰할 수 있지만, 단백질은 양, 음전하를 갖고 있어 SDS-sample buffer와의 혼합이 필요하며 Poly Acrylamide gel에서 관찰할 수 있습니다....2025.01.13
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PAGE를 이용한 단백질 검정 실험 보고서2025.05.141. 단백질 전기영동 이번 실험은 단백질의 전기영동을 통해 말 혈청 속 단백질의 크기를 확인하기 위한 실험입니다. 전기영동은 주로 단백질의 순도나 성질의 분석 및 분리에 사용하는 방법으로, 단백질 분자가 이동하는 속도는 각 단백질이 가지고 있는 전기적 or 물리적 상태에 따라 서로 다르기 때문에 분리가 일어나게 됩니다. 이번 실험에서는 SDS-PAGE 방법을 사용해 실험을 진행했습니다. 2. SDS-PAGE 원리 SDS-PAGE는 Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis...2025.05.14
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