소개글
"간 조직 균질화, 단백질 정량"에 대한 내용입니다.
목차
1. 간의 기능과 간 기능 검사
1.1. 간의 역할
1.2. 간 기능 검사의 원리
1.3. 간 기능 검사 항목
2. 단백질 정량법
2.1. UV 분석법
2.2. Biuret 법
2.3. Lowry 법
2.4. Bradford 법
2.5. Bicinchoninic acid (BCA) 법
2.6. Ninhydrin 법
2.7. Kjeldahl 법
3. Lowry 법의 원리
3.1. 포스포몰리브덴산을 함유한 시약의 특성
3.2. Lowry 법의 발색 원리
4. 단백질 정량 시 비색법과 전기영동법의 차이
5. 실험 방법
5.1. 간 균질액 제조
5.2. Lowry 법을 이용한 단백질 정량
6. 실험 결과
7. 고찰
8. 요약
9. 참고 문헌
본문내용
1. 간의 기능과 간 기능 검사
1.1. 간의 역할
간은 가로막 아래 우상복부에 위치한 장기로, 탄수화물 대사, 아미노산 및 단백질 대사, 지방 대사, 담즙산 및 빌리루빈 대사, 비타민 및 무기질 대사, 호르몬 대사, 해독 작용 및 살균 작용 등의 주요 기능을 담당한다"." 간은 많은 기능을 담당하기에 생명 유지에 필수적인 장기 중 하나이다"." 하지만 여러 질환들에서 간에 손상을 줄 수 있기 때문에, 이러한 질환들을 정확히 진단하는 것이 중요하다".
1.2. 간 기능 검사의 원리
간 기능 검사의 원리는 다음과 같다.
간 기능 검사란 간의 기능 상태를 평가하기 위해 수행하는 여러 생화학적 검사들의 조합이다. 주요 검사로는 AST, ALT, ALP, GGT, 빌리루빈 등이 있으며, 이외에도 총 단백질, 알부민, 젖산탈수소효소(LDH), 암모니아 등의 항목을 더하여 검사하는 경우도 많다.
간 기능 검사의 기본적인 원리는 측정하고자 하는 물질과 반응하는 효소나 색소, 또는 측정하고자 하는 효소의 기질에 해당되는 물질을 넣고 효소 반응이나 발색 반응을 시킨 후 흡광도를 측정하는 것이다. 즉, 반응이 일어나면 특정 파장의 빛을 잘 흡수하는 물질이 생성되고, 그 물질의 농도에 비례하여 흡광도가 증가하므로 흡광도 측정을 통해 해당 물질의 농도를 알 수 있다.
예를 들어, AST(aspartate aminotransferase)와 ALT(alanine aminotransferase) 검사의 경우 간 세포 손상 시 혈중으로 유리되는 이들 효소의 농도를 측정하여 간 기능을 평가한다. 또한 ALP(alkaline phosphatase) 검사는 간담도계 질환 시 증가하는 ALP의 농도를 측정하여 진단에 활용한다. 이와 같이 간 기능 검사는 간 질환의 진단, 경과 관찰, 치료 효과 판정 등에 널리 이용되고 있다.
1.3. 간 기능 검사 항목
간 기능 검사 항목에는 AST, ALT, ALP, GGT, 빌리루빈(Bilirubin) 등이 있으며, 이외에도 총 단백질, 알부민, 젖산탈수소효소(LDH), 암모니아 등의 항목을 더하여 검사하는 경우도 많다. 간 기능 검사들의 기본적인 원리는 측정하고자 하는 물질과 반응하는 효소나 색소, 또는 측정하고자 하는 효소의 기질에 해당되는 물질을 넣고 효소 반응이나 발색 반응을 시킨 후 흡광도를 측정하는 것이다.
AST(Aspartate Aminotransferase)와 ALT(Alanine Aminotransferase)는 간 손상 시 높게 나오는 효소로, 간염이나 간경화 등 간 질환의 진단에 활용된다. ALP(Alkaline Phosphatase)는 간 담도계 질환 진단에 사용되며, GGT(Gamma-Glutamyl Transferase)는 알코올성 간 질환 진단에 유용하다. 빌리루빈은 붉은 색소로 간 담도계 질환 진단에 사용된다.
이외에도 총 단백질과 알부민은 간의 단백질 합성 기능을 평가하고, LDH는 간 손상 시 증가하는 효소로 간 질환 진단에 도움을 준다. 또한 암모니아는 간의 해독 기능 저하 시 증가하므로 간성 혼수 진단에 이용된다.
종합적으로 간 기능 검사는 간의 주요 기능들을 평가하여 간 손상이나 간 질환을 진단하고 그 정도를 파악하는 데 활용된다. 각 검사 항목들은 간의 서로 다른 기능을 확인하므로, 이들을 조합하여 검사함으로써 보다 정확한 간 기능 평가가 가능하다.
2. 단백질 정량법
2.1. UV 분석법
UV 분석법은 시료 내 단백질의 농도를 분광 광도계를 이용하여 280nm 또는 200nm에서 측정할 수 있는 방법이다. 이 방법은 다른 단백질 정량법과 달리 특별한 시약의 첨가나, 반응을 위한 배양 시간이 필요하지 않으며 표준 단백질을 이용한 표준곡선이 필요하지 않는 장점이 있다.
그러나 UV 분석법의 단점은 시료 내 단백질에 반방향족성 곁사슬을 가진 아미노산이 없는 경우 280nm에서 측정할 수 없으며, 시료 내 DNA(260nm에서 최대 흡광도)와 같이 비슷한 파장영역에서 흡광도를 가지는 물질이 있을 경우 단백질의 농도만을 정확하게 측정하기 어렵다는 것이다.
2.2. Biuret 법
Biuret 법은 알칼리 조건에서 Cu2+과 단백질의 펩티드 질소들 간의 결합으로 생성되는 보라색 착화합물의 흡광도를 540~560nm에서 측정하는 방법이다.
Biuret 법은 단백질의 아미노산 조성에 큰 영향이 없는 장점을 가지고 있으며, 1~10mg/ml의 비교적 높은 농도의 단백질 정량에 적합한 방법이다. 그러나 단점은 표준 단백질을 이용한 표준 곡선이 필요하다는 것이다.
즉, 단백질 용액에 Biuret 시약을 가하면 Cu2+이온과 단백질의 펩티...
참고 자료
[네이버 지식백과] 간, 건강백과
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=938596&cid=51006&categoryId=51006
[네이버 지식백과] 간 기능 검사, 건강백과
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=927664&cid=51007&categoryId=51007
[네이버 지식백과] 인몰리브덴산, 생명과학대사전, 강영희, 도서출판 여초, 2008
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=420834&cid=60261&categoryId=60261
[네이버 지식백과] 페놀시약, 영양학사전, 채범색 외 1인, 아카데미서적, 1998
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=369486&cid=50366&categoryId=50366
[네이버 지식백과] 비색법, 화학용어사전, 화학용어사전편찬회 외 1인, 일진사, 2011
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=606167&cid=42420&categoryId=42420
[네이버 지식백과] 전기영동법, 모발학 사전, 류은주, 광문각, 2003
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=515485&cid=42407&categoryId=42407
생화학실험, 부성희 외 3인, 청문각, 2019, p96-101
생물학실험서, 민철기 외 1인, 라이프사이언스, 2004, p31-32
단백질 정량 http://blog.naver.com/nango0o/140072058692
변기원, 원혜숙, 송태희. 「이해하기 쉬운 생화학」. 파워북(2015)
부성희, 조만호, 이상원, 김기영. 「생화학 실험」. 청문각(2015)
[네이버 지식백과] 간 기능 검사 [liver function test] (서울대학교병원 의학정보, 서울대학교병원)
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=927664&mobile&cid=51007&categoryId=51007
[네이버 지식백과] 인몰리브덴산(인몰리브데넘) [phosphomolybdic acid, 燐~酸] (생명과학대사전, 초판 2008., 개정판 2014., 도서출판 여초)
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=420834&cid=60261&categoryId=60261
