Add 5 l of 10x DpnI buffer to each tube. 13. ... The because DpnI endonuclease specifically cleaves fully methylated GMe6ATC sequence. ... In Vitro Mutagenesis Using Double-stranded DNA Templates: Selection of Mutants with DpnI Introduction
현대생물학실험2 Report ❚ 분반 4반 ❚ 학부 생명과학전공 ❚ 담당 교수 ❚ 학번 ❚ 담당 조교 ❚ 이름 GFPuv를 이용한 Site-directed mutagenesis의 실습과 DNA sequencing 결과의 분석 연습 Abstract Site-directe..
DpnI 이번 실험에서 특히 중요한 것은 wild-type DNA만을 선별적으로 digestion시키는 DpnI이다. ... 따라서 이번 실험에서는 우리가 원하는 mutant DNA가 양쪽 모두 unmethylated DNA이기때문에 DpnI에의해 파괴되지 않을 수 있었던 것이다. 4.. ... methylated 된 DNA를 자르는 restriction enzymes이 1979년 Geier와 Modrich에 의해 Diplococcus pneumoniae에서 처음 발견되어 DpnI이라는
〔DpnI, Pfu DNA polymerase에의해 methylated parental template는 digestion되어 제거된다.〕 (4) 37℃에서 30min incubation ... 2min at 54℃ and 1min at 72℃ → 5~10 cycle (3) parental template DNA와 새롭게 합성된 mutagenesis-primer를 혼합하고, DpnI ... few rounds of PCR (DNA replication 중 다른 변이가 생기는 것을 방지하기 위해, proofreading 기능을 가진 Pfu polymerase를 사용) → DpnI의