SDS,아가로즈젤

소개

SDS겔과 아가로즈겔
차이점

목차

SDS겔의 조성과 역할
아가로즈젤의 조성과 역할

본문내용

SDS겔

조성:

acrylamide solution : Polymerization반응을 시켜서 gel을 반드는 용액입니다. 주로 30%-40%의 acrylamide stock 용액을 이용하여 final concentration 기준으로 0.1% SDS, 10-20% 정도의 acylamide, Tris buffer 그리고 ammonium persulfate, TEMED를 넣으면 SDS-PAGE용 gel이 만들어 집니다

protein makers

protein samples

1X SDS gel-loading buffer

1X Tris-glycine electrophoresis buffer

역할 : 전기영동법

황산도데실나트륨 폴리아크릴아미드 겔 전기영동법(SDS-PAGE)도 역시 유용한 전기영동법의 한 가지이다. 이 방법은 특히 단백질이 단위체인지 아닌면 중합체인지를 결정할 때와, 소중합체를 구성하는 소단위체들의 수와 크기를 결정할 때 유용하게 사용한다. 샘플을 로딩하고 전기를 걸어주면 이온들은 (+)쪽으로 진행하게 됩니다.이 때 이동되는 것이 단백질, Cl 이온, Glycine 이온등이 있습니다.이 경우 단백질은 SDS에 둘러싸여 있어서 모드 음전하를 띠고 있고 Cl- 역시 음전하를 띱니다. 문제는 글리신인데 이것의 pI (Net Charge 가 0이 되는 pH)가 대략 6.2 정도입니다. 따라서 글리신은 pH6.8의 Stacking gel에서 일부만 음전하를 띠게 되는 것이며 결국 Stacking gel에서의 이온들의 이동속도는 Cl- > 단백질 > Glycine 이온의 순서가 됩니다.전기장을 걸어주었을 때 염소이온은 가장 작기 때문에 가장 먼저 이동하고 글리신은 늦게 이동하게 됩니다. 이렇게 이온들간의 이동의 차이가 생기면 그 사이에는 국부적으로 High Voltage gradient가 만들어지게 되며 결국 그 안의 단백질의 움직임은 매우 빠르게 움직이게 되는 것을 의미합니다.이렇게 단백질의 이동속도가 두 이온(염소이온,글리신잉온)사이에서 빨라진다는 것은 단백질 크기가 크거나 작은 것의 차이로 인한 이동속도 차이를 거의 없게 만드는 의미가 있습니다.

참고자료

· 엠파스네이버검색