interleukin - 12 Promotes Enhanced resistance to Listeria

소개

interleukin - 12 Promotes Enhanced resistance to Listeria
monocytogen infection of Lead-Exposed Mice

목차

없음

본문내용

실험을 할때 BALB/cByJ 의 암컷인 3~4개월 된 마우스를 실험에 사용하며 혈청 코르티코스테론을 위한 방사면역 측정법은 corticosterone-21-thyroglobulin에 대항해 토끼 내에서 자란 항 면역 혈청을 사용함으로써 수행되었다.
간단히, serum 0.1ml가 폴리프로필렌 실험관에 추가되고, 단백질은 0.4ml의 순수한 에탄올에 의해 촉진되며, 10분간 500g이 원심분리기로 분리되었다.
0.09ml의 분량의 assay buffer(0.1 M NaCl을 포함한 0.05 M tri HCl, 0.1% NaN3, 그리고 소과의 혈청 알부민)가 상청액 0.01ml에 추가되었다.; 30분동안 실온에서 배양된 assay buffer 안의 NaCl 없는 묽은 항혈청 0.5ml가 위 실험관에 추가되었다.
각각의 실험관에 0.1ml의 3H-corticosterone(37.5pg, 1800ppm) (DuPont., Wilmington, DE)가 4℃에서 15분간 추가되어졌다. 그리고 assay buffer 안의 찬 덱스트란으로 코팅된 검은빛 부유물 0.2ml 가 매개물과 함께 배양된 혼합물에 0℃에서 10분간 추가되어졌다.
그다음 그 시료들은 4℃에서 15분 동안 2000g이 원심 분리되었다.
0.25ml 상청액은 3ml의 섬광 액체와 함께 유리병에 추가되었고, 섬광계수관에 의해 계산되었다. 0.47에서 60ng의 코르티코스테론/assay tube를 함유한 용액을 이용하여 표준 곡선이 그려졌다. 알려지지 않은 시료의 가치는 표준곡선의 보간법에 의해 측정되어졌다.

RT-PCR은 중요한 mRNA들을 검출하는데 사용되었다. Total RNA는 RNA extraction buffer RNAzol을 이용하여 비장에서 추출된다. A GeneAmp RAN PCR kit은 RT-PCR을 위해 사용되었다. 정제된 total RNA 1㎍의 상당한 양이 M-MLV RT와 무작의 hexanucleotides를 이용하여 역전사에 의해 합성하는 첫 번째 요소 cDNA를 위한 기질로서 사용되어 진다. 90℃에서 5분간 가영하는 반응이 종결된 후에 PCR반응은 IL-6, p40, p35 mouse 의 primer주형과 주거보존 유전자 β2-microgobulin을 이용하여 역전사 되어진 cDAN를 확대하기 위해서 제조업자의 지시에 따라 수행되어 진다.

참고자료

· Lead 에 대한 참고자료
· (interleukin - 12 Promotes Enhanced resistance to Listeria
· monocytogen infection of Lead-Exposed Mice)