[A]서강대학교 현대생물학실험4_레포트_cell fractionation_full report

소개

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목차

1. Results
2. Discussion

본문내용

이번 실험은 mouse를 해부한 뒤, mouse의 뇌, 간, 심장, 근육을 잘게 잘라 cell fractionation을 통해 nuclei와 mitochondria를 얻어 염색 후, 현미경을 통해 400배율에서 관찰하였다. 실험에서 사용한 원심분리 방법에는 differential centrifugation을 사용하였는데, 이는 cell fraction에서 크기와 밀도에 의해 분리되는 원리로 특정 세포 소기관을 분리하기 위해서 원심분리를 반복하여 사용하였다. differential centrifugation에서는 크기나 밀도에 따라 침전되는 속도에 차이가 존재하는데, 크고 밀도가 높을수록 빠르게 침전하게 된다. 또한, 침전 속도는 원심력을 이용하여 증가시킬 수 있다. Homogenate를 얻은 뒤, 낮은 속도로 짧은 시간의 원심분리를 가하면, cell에서 제일 크고 밀도가 높은 핵이 침전되게 된다. 이후, 원심력을 높여 원심분리를 가하게 되면 핵 다음으로 크고 밀도가 높은 미토콘드리아 등의 세포 소기관이 침전되게 되어 pellet을 얻는 원리로 작용한다. (Ref 1)
원심분리를 통해 얻은 nuclei에 사용한 염색약은 methyl green이다. Positive-charge를 띄는 염색약으로 핵에 존재하는 nucleus acid의 negative-charge를 띄는 phosphate와 binding하게 되며 청색이나 청녹색을 띄는 특징이 있다.

참고자료

· LIVSHITS, Mikhail A., et al. Isolation of exosomes by differential centrifugation: Theoretical analysis of a commonly used protocol. Scientific reports, 2015, 5.1: 1-14
· Kim, S. K., & Nordén, B. (1993). Methyl green: A DNA major‐groove binding drug. FEBS letters, 315(1), 61-64
· Löscher W, Potschka H. Blood-brain barrier active efflux transporters: ATP-binding cassette gene family. NeuroRx. 2005 Jan;2(1):86-98
· Ghazi‐Khansari, M., Mohammadi‐Bardbori, A., & Hosseini, M. J. (2006). Using Janus green B to study paraquat toxicity in rat liver mitochondria: role of ACE inhibitors (thiol and nonthiol ACEi). Annals of the New York Academy of Sciences, 1090(1), 98-107
· Prieto, D., Aparicio, G., Morande, P. E., & Zolessi, F. R. (2014). A fast, low cost, and highly efficient fluorescent DNA labeling method using methyl green. Histochemistry and cell biology, 142, 335-345