[A+]서강대학교 현대생물학실험1_1차 풀레포트_Taq DNA polymerase 발현 후 정제, 정제된 Taq DNA polymerase의 PCR을 통한 활성 확인

소개

"[A+]서강대학교 현대생물학실험1_1차 풀레포트_Taq DNA polymerase 발현 후 정제, 정제된 Taq DNA polymerase의 PCR을 통한 활성 확인"에 대한 내용입니다.

목차

Abstract
Introduction
Materials and Methods
Result
Discussion
References

본문내용

Taq DNA polymerase를 과발현시킨 뒤, 정제하여 얻어내는 실험을 진행하여 buffer의 기능과 단백질 발현 과정 및 단백질 정제 방법을 이해하고, Target protein의 정제를 확인하기 위한 PCR과 전기영동 원리를 터득한다. pTTQ18 vector에 삽입된 Taq DNA polymerase gene을 E. coli의 lac operon system과 IPTG를 이용하여 induction하였으며, 발현된 단백질을 얻기 위해 cell wall을 EDTA와 Lysozyme을 이용하여 Disruption 시켜주었다. 이후 non-ionic detergent인 Tween 20와 Nonidet P40을 이용하여 단백질 변성을 최소화하여 lipid bilayer를 깨 주었고, 75℃에서 1시간 incubation으로 다른 단백질들을 denaturation 시켰다. Ammonium sulfate를 이용한 salting out을 통해 Taq DNA polymerase을 precipitation 실시하였으며, dialysis를 이용하여 사용한 Ammonium sulfate를 제거하였다. 정제하여 얻은 Taq DNA polymerase를 확인하기 위해 각 농도별로 tube를 제작한 뒤, 752bp를 갖는 template DNA를 이용하여 PCR을 실시하였으며, 시중 판매하는 Taq DNA polymerase를 positive control로 이용하였다. PCR product를 gel electrophoresis하여 DNA band를 분석하였다. 본 실험에서 정제하여 얻은 Taq DNA polymerase에서 band가 관찰되지 않았고 Positive control에서만 DNA band가 나타났으며, 750bp의 크기를 갖는 것을 확인하였다.

참고자료

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