[서강대학교 현대생물학실험2] (3차 풀레포트) DNA ligation, Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA

소개

"[서강대학교 현대생물학실험2] (3차 풀레포트) DNA ligation, Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

ligase T4 DNA(Deoxyribo nucleic acid) ligase는 DNA의 말단을 phosphodiester bond로 연결하는 효소이다. Vector와 insert의 ligation은 vector와 insert의 ligation, vector의 self-ligation, insert의 selfligation 세 가지 형태로 나타날 수 있다. 본 실험은 HindⅢ와 NdeⅠ를 통해 double-digestion한 vector와 insert를 T4 DNA ligase를 이용해 ligation하였고, 이를 E.coli(Escherichia coli)에 transformation하여 cloning하였다. Self-ligation vector의 colony와 vector-insert ligation colony를 비교하기 위해서 vector에 HindⅢ, NdeⅠ를 첨가한 vector only product와 vector와 insert에 HindⅢ, NdeⅠ를 첨가한 insert-vector ligation product를 조성하여 competent cell에 transformation하였다.
이후 LB(Luria-Bertani) ampicillin agar plate에 배양하여 colony를 확인하였고, vector only보다 ligation
product의 colony가 더 많이 형성된 것을 관찰할 수 있었다. 이는 double-digestion으로 인해 vector의
self-ligation이 어려워 colony가 더 적게 나타난 것으로 보인다. 형질전환한 E.coli에는 plasmid
DNA뿐만 아니라 chromosomal DNA를 포함하고 있다.

참고자료

· Brown, T. A. (2020), Gene cloning and DNA analysis, 7th edition, Wiley Blackwell, pp.37-39
· Brown, T. A. (2007), Genomes3, 3rd edition, Garland Science Publishing, pp.43-47
· Howe, C. J. (2007), Gene Cloning and Manipulation, 2nd edition, Cambridge University Press,
· pp.52-73