유전학실험 Gene insertion & deletion

목차

1. Subject
2. Object
3. Introduction
4. Materials & Method
5. Result
6. Discussion
7. Reference

본문내용

1. Subject : Gene insertion & deletion

2. Object : PCR product를 yeast에 transformation 시킨 뒤 이를 selection하여 원하는 gene을 가진 yeast 형성

3. Introduction
- PCR
Polymerase의 연쇄 반응을 통해 DNA를 빠르게 증폭시키는 방법으로 Denaturation, Annealing, Elongation의 3단계로 구성된다, 이때 Denaturation에서 DNA는 95℃의 고온에 의해 single strand가 되며, 이후 Annealing에서 primer가 결합한다. Annealing 도는 Tm(primer의 절반은 double strand로. 나머지 절반은 single strand로 존재하는온도로 일반적으로 (G+C)X4℃ + (A+T)X2℃로 계산된다)값에서 4~5℃ 낮은 온도를 이용한다. Elongation에서는 약 75℃에서 DNA polymerase의 작용에 의해서 DNA의 길이 신장이 일어난다. PCR의 결과값에 영향을 미치는 요인에는 각 단계의 온도, cycle 횟수, buffer solution, primer, DNA polymerase의 종류 등이 있다,

참고자료

· Chaussee MS, Hill SA. Formation of single-stranded DNA during DNA transformation of Neisseria gonorrhoeae. J Bacteriol. 1998 Oct;180(19):5117-22. doi: 10.1128/JB.180.19.5117-5122.1998. PMID: 9748444; PMCID: PMC107547.
· https://en.wikipedia.org/wiki/Sanger_sequencing
· https://en.wikipedia.org/wiki/Sanger_sequencing