세포생리학실험_단백질 검출_BCA assay, 뷰렛반응, 닌히드린 반응

목차

Ⅰ. 기본정보
Ⅱ. 서론
Ⅲ. 실험재료 및 방법
Ⅳ. 실험 결과 및 결론
Ⅴ. 고찰
Ⅵ. 참고문헌

본문내용

Ⅰ. 기본정보
실험 제목: 단백질 검출
실험 목적: 단백질에 대해서 알고, BCA assay, 뷰렛반응, 닌히드린 반응을 통해 단백질을 검출한다.

Ⅱ. 서론
1. 단백질(protein)
단백질은 아미노산이 펩티드 결합으로 연결된 복잡한 사슬구조의 고분자 물질이다. 아미노산은 탄소에 아미노기(-NH2)와 카르복실기(-COOH)가 붙어있는 것이 특징이다. 자연계의 20가지의 아미노산은 아미노산이 가지는 R기의 종류에 따라 구분된다. 단백질의 존재를 증명하기 위해서는 발색반응을 사용할 수 있는데, 단백질 분자에 포함된 반응기가 특수한 시약과 어울려서 나타내는 반응이다(김기태 외 4명. 2009).

2. BCA assay
알칼리의 조건에서 단백질의 펩타이드 결합과 반응하여 Cu2+가 Cu+로 환원된다. 이후 2분자의 Bicinchoninic acid(BCA)가 환원된 Cu+와 배위 결합해 562nm에서 최대 흡광도를 가지는 강한 보라색을 띤다. Cu+의 생성은 곧 단백질의 농도와 비례하기 때문에 알려지지 않은 샘플의 단백질 함량은 알려진 단백질 표준과 비교하여 분광광도법으로 알아낼 수 있다(Walker, J. M.. 2009).

3. 뷰렛반응
뷰렛 시약은 단백질과 폴리펩티드를 검출하기 위해 사용하는 시약이다. 뷰렛시약은 원래 푸른색을 나타내나, 단백질과 반응하면 자주색을 나타내고 짧은 폴리펩티드와 반응하면 분홍색으로 변한다(김기태 외 4명. 2009). 뷰렛은 알칼리성 CuSO4(2가의 구리이온)와 반응하여 보라색의 착화합물을 만든다. 두 개 이상의 펩티드 결합을 가진 화합물도 마찬가지로 유사한 착화합물을 만들며, 단백질의 경우에는 청자색 또는 적자색을 나타낸다. 착화합물의 색은 1-2시간 정도는 안정하게 유지되나, 그 이상에서는 점점 색도가 증가한다(김기태 외 4명. 2009).

참고자료

· Walker, J. M.. 2009. The bicinchoninic acid (BCA) assay for protein quantitation. The protein protocols handbook, 11-15.
· 김기태 외 4명. 2009. 실험생물학. 녹문당. pp. 29-42.