생명과학보고서_Immunostaining (아주대전공실험2)

소개

아주대학교 전공실험2 만점 보고서입니다

목차

1. 실험목적
2. 실험원리
3. 실험재료 및 방법
4. 참고문헌

본문내용

1. 실험목적
본 실험은 cell culture를 통해 세포를 배양하여 counting해보고 적정 confluence에 맞춰 immunostaining을 통해 세포의 상태를 시각적으로 직접 관찰해보기 위해 수행되었다.

2. 실험원리
Cell culture란 다세포 생물체로부터 분리한 세포를 protease 등의 처리로 단세포로 분리하여 배양하는 과정이다. 우선 생체조직을 무균적으로 선발하여 trypsin 등의 소화효소로 처리한 후 단세포로 분리하여 초대배양을 한다. 또 계대 중인 세포계나 세포주를 같은 효소처리로 분산시켜 얻어낸 단세포를 증식배지에 이식, 접종하여 다음의 계대배양을 한다. Culture condition은 세포 type에 따라 매우 다양하지만 기본 환경은 필수 영양소(탄수화물, 아미노산, 비타민), serum(호르몬, growth factor), 가스(산소, 이산화탄소)를 공급하고 물리화학적 환경(pH, 온도)이 조절되어야 한다. pH 지시약으로서 media에 첨가되는 페놀레드는 pH 6.8~8.4 변색역을 가지며 산성색은 황색, 염기성색은 적색이다. 세포배양에서 세포를 키우는 기본 시스템이 두가지 있다.
대부분의 세포는 solid or semi-solid substrate에 부착된 상태로 배양(adherent culture)되어야 하지만 일부는 media에 부유한 상태로 배양(suspension culture)될 수 있다. 표 1을 참고하면 각 방법이 적절하고 활용되는 실험은 각기 다름을 알 수 있다. Adherent culture에서는 세포가 surface에서 떼어져야 하는데, 그 방법으로는 흔들거나 긁어내는 기계적 방법과 trypsin과 같은 효소를 이용하는 방법이 있다. 표 2를 보면, 세포의 종류, 부착 강도에 따라 방법을 선택하면 됨을 알 수 있다.

참고자료

· Gagnieur, L., Cheval, J., Gratigny, M., Hébert, C., Muth, E., Dumarest, M., & Eloit, M. Unbiased analysis by high throughput sequencing of the viral diversity in fetal bovine serum and trypsin used in cell culture. Biologicals, 42(3), (2014)., pp.145-152.
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· Perdue, T. D., & Parthasarathy, M. V. In situ localization of F-actin in pollen tubes. European journal of cell biology, 39(1), (1985). pp.13-20.
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