일반생물학실험 결과레포트 [실험8] 대장균에서 플라스미드 DNA 소량 분리

목차

1. 실험에서 사용된 S1, S2, S3 buffer에 들어 있을 성분을 추정해 보고 그 역할을 적으시오.
2. 실험 방법을 자신의 말로 정리해보시오.
3. 각 step에서 plasmid DNA가 존재하고 있는 곳을 적으시오.
4. 염색체 DNA와 플라스미드 DNA의 차이점을 적으시오.
5. E.coli와 같은 미생물을 배양하는데 사용되는 LB media(LB broth)의 만드는 방법과 그 역할을 적으시오.

본문내용

- S1 buffer (재부유, Resuspension buffer): EDTA, RNase, glucose, Tris-Cl
S1의 주된기능은 세포벽을 파괴하고 RNA분해를 촉진하는 것이다.
glucose는 삼투압을 유지, Tris-Cl은 ph를 유지한다. 또한 EDTA는 킬레 이트로써 세포벽에 있는 이온들을 제거하여 세포벽 파괴를 용이하게 한다. 이때 칼슘이온은 세포벽의 안정성유지와 관련있기 때문에 세포벽 EDTA를 사용하면 DNA손상을 줄이고 세포벽 lysis를 쉽게한다. RNase는 RNA를 파괴해서 실험의 목표물인 플라스미드 DNA 채취가 쉽도록 한다.

- S2 buffer(용해, Lysis buffer): 도데실황산나트륨(SDS), 수산화 나트륨
S2는 Alkalin lysis와 세포막 분해, DNA와 RNA변성, 단백질 제거를 담당 한다.도데실황산나트륨은 세포막을 깨고, 수산화 나트륨은 DNA를 변성시키 고 수소결합을 끊어지게 한다. SDS는 일종의 계면 활성제처럼 단백질을 변 성시키고 막을 파괴시킨다. 이는 세포막에 포함된 인지질과 단백질을 제거 하여 세포막을 터트림으로써 세포 성분의 방출을 유도한다. 세포의 여타 다 른 단백질들도 변성시켜서 플라스미드 DNA만 얻어낼 때 방해자들을 줄인 다.

- S3 buffer (중화, Neutralization buffer) : 빙초산(glacial acetic acid)으로 적정한 아세트산 칼륨(potassium acetate)
S3은 lysis buffer 때문에 높아져버린 pH를 다시 중성으로 내려준다. 그로 인해 변성되었던 원형의 플라스미드 DNA가 다시 제 모양을 찾는다.

참고자료

· 미생물학 실험 (9주차) - Plasmid purification (플라스미드 정제)|작성자 진
· https://blog.naver.com/pyj984/222015515059
· [세마고/비타] 대장균 플라스미드 DNA 검출 실험|작성자 비타
· https://blog.naver.com/vita1234567/220790978664
· DNA 클로닝(cloning) 기법 실험으로 형질전환 대장균 배양 실험 및 전기영동을 이용한 형질전환 대장균 DNA 관찰|작성자 아름다운5월
· https://blog.naver.com/otaknoid/221038176878
· KAIST 2017 가을학기 생화학실험 Biochemistry Experiement (BS200) Lecture Note/Protocol/Homework
· [대학교 생화학실험] 플라스미드 DNA 미니프렙(Vector DNA miniprep)/ 나노드랍 측정(nanodrop measurement)|작성자 의데공대생
· https://blog.naver.com/hafs_snu/221108898928
· [대학교 생화학실험] LB 배지, LA 배지, LAC 배지 만들기 (LB broth & Plate Preparation)|작성자 의데공대생
· http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=hafs_snu&logNo=221096380404&categoryNo=54&parentCategoryNo=0&viewDate=&currentPage=1&postListTopCurrentPage=1&from=postView&userTopListOpen=true&userTopListCount=10&userTopListManageOpen=false&userTopListCurrentPage=1
· [출처][BIO/생명과학]LB배지에 대해서(구성성분)|작성자 subbee
· https://m.blog.naver.com/bio0719/220983752845
· 미생물학 실험 (9주차) - Plasmid purification (플라스미드 정제)|작성자 진
· https://blog.naver.com/pyj984/222015515059