실험보고서2 단백질 정량 및 침전

최초 등록일
2018.11.12
최종 저작일
2017.05
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목차

Ⅰ. 실험날짜

Ⅱ. 실험제목

Ⅲ. 실험목적

Ⅳ. 원 리
1) 배경 이론

Ⅴ. 실험기구 및 시약
1) 실험기구 및 장치
2) 시약

Ⅵ. 실험과정
1) 실험방법
2) 실험계산

Ⅶ. 결 과

Ⅷ. 토의 및 결론

Ⅸ. 참고문헌

〔 그림 및 표 목차 〕
<그림 1> 스탠다드 흡광도-농도 그래프
<표 1> 단백질 희석용액 흡광도 값
<표 2> 단백질 희석용액 농도 값
<표 3> 단백질 침전에 사용되는 ammonium sulfate의 양

본문내용

실험목적
단백질을 침전시키고 분리하여 정량하는 방법에 대해 학습한 후, 키위로부터 단백질 정량 및 침전 실험을 수행한다.

<중 략>

실험방법

# 단백질 정량
a. 아세테이트 버퍼 200mM을 이용해 50mM 100ml를 만든다.
b. 50mM 100ml 버퍼에 키위 10g을 넣고 얼음을 채워넣은 통에 비커를 넣는다.
c. stirrer로 한 시간 동안 돌리고 난 후 각각 30분과 1시간 후에 1ml를 빼내 튜 브에 넣는다.
d. 두 개의 용액을 각각 1,2,4,8배 희석하고, Bradford 시약을 20배 희석한 후 단백질 용액 20ul, Bradford 시약 980ul를 넣어 총 1ml의 용액을 만든다.

# 단백질 침전
a. 샘플 50g을 착즙기로 착즙한다.
b. 착즙액을 15000rpm 을 30분 원심분리하고 상등액은 회수하여 pH 4 버퍼에 1:1 비율로 현탁한다.
c. 현탁액 100ml를 비커에 넣고 그 비커를 플라스틱 용기에 담고 주변을 얼음으 로 채운다..
d. stirrer 위에 놓고 ammonium sulfate를 천천히 첨가하며 단백질을 침전시킨 다.
e. 표를 참고하여 0~40% / 40~70% / 70~100% 범위의 단백질을 분리한다.

실험계산
a. 단백질 정량
위 표에 나온 값은 각각의 단백질 희석 용액을 UV spectrophotometer로 흡광도를 측정한 값인데 Bradford 시약의 흡광도 값이 0.1544가 나왔기 때문에 그 시약의 흡광도 값을 빼주어 단백질 희석 용액의 흡광도를 나타낸 표이다.

참고 자료

「UV spectrophotometry」, 네이버 블로그, 접속일자 2017.11.11
http://blog.naver.com/sincoccr?Redirect=Log&logNo=220804991334
「biuret method」, 네이버 지식백과, 접속일자 2017.11.11
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=492603&cid=55558&categoryId=55558
「BCA method」, 네이버 블로그, 접속일자 2017.11.11
http://blog.naver.com/jasonhyun92?Redirect=Log&logNo=220793665282
「Lowry method」, 네이버 지식백과, 접속일자 2017.11.11
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=293274&cid=42412&categoryId=42412
「Bradford method」, 네이버 지식백과, 접속일자 2017.11.11
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=427917&cid=42411&categoryId=42411

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