생화학실험 예비보고서 Plasmid purification & DNA 전기영동 (Agarose gel)

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최초 등록일
2018.10.11
최종 저작일
2016.12
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목차

1. 실험 목적
2. 실험 원리
3. 시약 및 기구
4. 실험 방법

본문내용

실험목적
- Plasmid DNA의 원형을 유지하는 구조적 특징을 이해하고, Alkaline lysis product를 이용하여 Plasmid DNA를 purification 한다.
- DNA Purification을 한 후 Agarose gel 전기영동을 통해서 DNA를 크기 별로 분리하여 확인한다.

실험원리
1) Plasmid purification
: Plasmid 또는 재조합 Plasmid DNA를 대장균에서 배양한 후 증폭된 Plasmid를 추출하고 정제하는 방법

(1) Plasmid
: 세균 내에서 염색체와 별개로 존재하면서 독립적으로 증식할 수 있는 이중나선 원형 DNA로서, 플라스미드 내의 유전정보는 숙주의 생존에 필수적이지는 않지만, 생존에 이점을 제공한다. plasmid DNA는 supercoiled 구조를 가지기 때문에 pH의 변화에 큰 영향을 받지 않아 변성이 되지 않는다.

이번 실험에서는 이 특징을 이용하여 순수한 plasmid만을 추출한다.

Mini-prep
: plasmid DNA를 소량 추출하는 방법

Alkaline lysis method
: pH 변화에 따라 염색체 DNA의 부정확 재생 능력을 이용하여 Plasmid DNA를 분리하는 방법으로 Mini-prep 중 가장 보편적으로 사용되는 방법이다. 기본적인 원리는 세균의 cell wall과 cell membane을 부수고 DNA만을 분리하는 것이다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하기 쉽지 않지만, chromosomal DNA는 분리과정에서 linear 형태가 되고 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용한다.

Boiling miniprep
: plasmid는 열에 의해 까어지고 염색체 DNA와의 원심분리에서 상층액을 회수 및 추출하는 방법

Lithium miniprep
: Alkaline lysis와 유사한 방법

참고 자료

없음
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