생명과학실험 레포트4 SDS PAGE gel 제조 Coomassie brilliant staining

목차

Ⅰ. 실험 일시
Ⅱ. 실험 목표
Ⅲ. 실험 목적
Ⅳ. 실험원리
Ⅳ. 실험원리
Ⅴ. 실험 재료
Ⅵ. 실험 방법
Ⅶ. 실험 결과
Ⅷ. Discussion
Ⅸ. 참고문헌

본문내용

Ⅰ. 실험 일시
2013 / 4 / 5 (금) 3:30pm ~ 5:30pm

Ⅱ. 실험 목표
Protein Mixture 를 SDS - PAGE 를 통해 size 별로 분리한다.
SDS - PAGE 실험을 위해 SDS - polyacrylamide gel 을 제조한다.

Ⅲ. 실험 목적
첫째, SDS - PAGE 와 전기영동에 관한 원리 및 기본지식을 익힌다.
둘째, 지난 실험에서 만들어 놓은 Gel loading sample 을 SDS - PAGE 를 통해 size 별로 분리한 뒤 단백질을 염색하여 Protein marker 와 비교하여 단백질의 분자량을 추정해본다.

Ⅳ. 실험원리
- SDS - PAGE 원리
단백질의 전기영동에서는 SDS-PAGE 가 가장 일반적인 방법으로 이용되고 있다. SDS-PAGE 의 원리는 단백질은 구성하는 아미노산에 의해서 (+) 혹은 (-) 전하를 띄지만 SDS 가 단백질과 결합하게 됨으로써 일시적으로 모든 분자들이 (-) 전하를 띄게 한다. 그리하여 양단에 전압을 걸어주면 모든 분자들이 양 (+) 극으로 이동하게 되고, gel 의 pore 사이즈에 의해서 걸리는 전기력의 차이로 인하여 protein 의 size 에 따라 각각의 단백질을 분리하게 되는 것이다. Protein 의 이동 거리는 일정하고 모두 음전하로 대전되었으므로 protein 의 분자량이 작거나, 걸어주는 전압이 강하면 protein 의 이동 속도가 빨라지게 된다. 하지만 이러한 단백질의 전기영동에서도 뭉쳐져 있는 단백질을 바로 분자량에 따라 분류할 수 없으므로 SDS-PAGE 는 두 단계로 진행된다. 첫 번째 단계는 뭉쳐져 있는 단백질들을 차곡차곡 쌓아서 Stacking 하는 과정이고 두 번째 단계는 본격적으로 차곡차곡 쌓여진 단백질들을 분자량이 작은 순으로 빠르게 양 (+) 극으로 이동하는 Running 과정으로 이루어진다.

참고 자료

생물학 실험서, 라이프 사이언스, 민철기, 강창수
단백질실험노트 (하), 월드사이언스, 김승호, 장규태
실험생화학, 월드사이언스, 김승호, 장규태