[생명과학실험] Antigen-antibody reaction을 통한 protein expression

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 자료

본문내용

1. 실험 목적
1.1. Antigen-antibody reaction을 통하여 protein이 cell 내의 어느 곳에서 발현하는지 알아보자.

2. 실험 이론 및 원리
2.1. Immunochemistry(면역화학)
세포의 단백질 발현 양상을 antigen-antibody reaction을 이용하여 특이적인 인식과 결합에 기초하여 조직 또는 세포 내 특정 antigen의 존재유무 및 존재부위를 알아보기 위해 사용하는 방법이다. 특정 단백질을 발현하는 세포에 상보적인 antibody 로 반응시키면, 서로 특이적으로 결합된다. 이때 이 antigen-antibody complex을 Secondary antibody 등을 처리하여 반응을 증폭시키고 발색시킨 후 현미경으로 관찰하면 세포의 단백질 발현 유무를 판단할 수 있다. 또한 DAPI staining과 같은 대조군을 이용한다면 특정 protein이 cell의 어느 곳에서 발현하는 지도 알 수 있다.

<중 략>

효소를 표지물질로 이용하는 방법은 형광색소나 방사성 동위원소에 비하여 여러 가지 장점을 갖고 있다. 즉, 효소의 반응이 반복되므로 민감성이 높고 방사성 동위원소와 같이 사용상의 규제와 특별한 시설을 필요로 하지 않으며, 형광물질이나 중금속은 형광현미경과 전자현미경적 검색에만 사용할 수 있지만 효소는 광학현미경과 전자현미경 모두를 사용할 수 있다.
양성반응을 관찰하기 위한 발색 과정은 부착시킨 효소의 종류에 따라 선택할 수 있다. 발색제는 Horse-Rradish Peroxidase를 부착시킨 검출계(detection system)를 이용한 경우 Diamino- benzidine(DAB), 3-amino-9-ethylcarbazole (AEC)를, Glucose Oxidase는 Tetrazoilum을 alkaline phosphatase는 BCIP/NBT, BCIP/INT, New fuchsin, Fast Red TR Salt 등을 사용 한다.

참고자료

· 없음