pGreenTIR 플라스미드의 추출과 확인

목차

Ⅰ. Introduction (서론)
Ⅱ. Meterials & Method (재료 및 방법)
Ⅲ. Results & Discussion (결과 & 논의)
Ⅳ. Reference (참고문헌)

본문내용

Ⅰ. Introduction (서론)

세균을 비롯해 많은 생물들이 염색체 외에 DNA 조각인 플라스미드를 가지고 있는데, 이러한 플라스미드는 상대적으로 크기가 작고 스스로 복제할 수 있는 능력이 있기 때문에 클로닝할 때 유용한 벡터로 활용되고 있다. (김효중. 2004)
이와 같이 유용한 벡터로 활용하기 위해서는 플라스미드 DNA를 추출해야 한다. 플라스미드를 분리하는 방법은 매우 다양하게 개발되어 있으나 기본적인 원리는 다음과 같다. 먼저DNA 추출은 세포조직 및 DNA 구조(단일가닥 또는 이중가닥)에 따라 처리 용액이나 일주 정제과정이 다르다. 특히, 원핵세포는 진핵세포와 다르게 세포벽이 존재하기 때문에 먼저 세포벽을 파괴하는 과정이 필요하다. 이때, 플라스미드 DNA는 원핵세포에서 추출하기 때문에 먼저 세포벽을 제거하는 과정이 필요하다고 할 수 있다. 하지만 원핵세포에는 플라스미드 DNA뿐만 아니라 원래 가지고 있는 염색체 DNA도 존재한다. 이 둘은 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. 하지만 플라스미드 DNA는 염색체 DNA에 비해 크기가 작으며 환상 DNA라는 특성의 차이를 이용하면 분리할 수 있다.
플라스미드 DNA를 분리하기 위한 기본적인 원리를 이용한 방법이 알칼리 용균(Alkali lysis) 방법으로 1979년에 번보임과 돌루 등에 의해 대장균에서 플라스미드를 분리하는 것으로 개발된 이후 지금까지 보편적으로 사용되고 있는 방법이다. 알칼리 용균 방법의 실험과정을 간단하게 살펴보면 다음과 같다. 먼저 박테리아 침전물이 담긴 미세원침관에 용액 I을 100㎕ 넣고 진탕하여 부유시킨다. 이때, 용액 I은 50mM의 glucose와 25mM Tris-Cl, 10mM EDTA를 이용하여 만든 pH 8.0의 용액으로, 여기서 EDTA는 세포벽의 견고함를 유지하는 데 필수적인 칼슘 이온을 제거해서 세포벽을 군데군데 무너지게 하는 역할을 한다. 이렇게 세포벽이 무너질 때, glucose는 삼투압을 유지시켜 세포의 외형을 유지시켜 주는 역할을 한다.

참고자료

· 김효중(2004). 유전학실험서. 서울:라이프사이언스. pp.123~125
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· http://www.mediver.com/bbs/view.php?id=micro&page=1&sn1=&divpage=1&sn=off&ss=on&sc=on&select_arrange=headnum&desc=asc&no=20
· 네이버블로그. 플라스미드 추출. 접속일자 : 2009년 10월 10일.
· http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=socater&logNo=130044715394&widgetTypeCall=true
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· Bric 실험. DNA 전기영동. 접속일자 : 2009년 10월 11일.
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· 유전단백체 기능제어 연구센터. 플라스미드 추출. 접속일자 : 2009년 10월 11일.
· http://www.genehunters.co.kr/Training/01_3_3.htm