그람염색 예비보고서

최초 등록일
2015.01.06
최종 저작일
2014.09
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목차

1. 실험날짜

2. 실험주제

3. 실험목적

4. 실험방법

5. 실험이론
1) 그람염색이란?
2) 그람염색법의 원리
3) 세균의 분류
4) 그람 양성균과 그람 음성균이 다르게 염색되는 이유
5) 펩티도글리칸
6) 병원균
7) 그람염색에 사용되는 시약의 원리

6. 참고문헌

7. 추가질문

본문내용

1. 실험날짜 : 2014.09.24

2. 실험주제 : 그람염색(gramstaining)

3. 실험목적 : 그람염색의 방법을 통하여 미생물을 실제로 염색해보고 염색과정을 습득하고, 어떤 원리에 따라 그람음성과 양성으로 나뉘는지 이해한다.

4. 실험방법
① 균 준비
② Slide glass를 알코올 램프 불꽃에서 잠깐 동안 가열시켜서 유막을 제거한다.
③ 배양 중인 세균을 넓게 편다.
④ 완전히 건조가 되면 Crystal violet으로 1min 동안 염색 ⇒ 증류수로 세척
⑤ Iodine으로 1min 동안 처리 ⇒ 증류수로 세척
※ 조심해서 다룰 것! 독성이 있음.
⑥ 95% Ethanol로 7초간 처리 탈색 ⇒ 증류수로 세척
※ 이 단계에서는 Ethanol을 너무 오래 처리하게 되면 탈색이 되어 Gram (+)와 (-)을 분별하는데 어려움이 생긴다. 양성균이 음성균으로 나올 수 있다.
⑦ Safranin으로 1min 동안 염색 ⇒ 증류수로 세척
⑧ 공기 중에서 건조한다.
⑨ 현미경으로 저배율부터 관찰한다.

5. 실험이론
1) 그람염색이란?
세균의 세포벽의 구조 차이를 이용하여 분류하는 기초적 세균염색법의 일종. C. Gram(1884)이 창안하였는데, 세균을 크게 2군으로 분류할 수 있다는 점에서 오래 전부터 사용되어 왔다. 우선 열고정시킨 세균을 염기성 색소로 염색한 후, I2-KI 혼합용액으로 처리한 다음, 아세톤 또는 알코올로 탈색하여 다른 색소로 염색한다. 처음에 염색한 색소로 염색되는 것을 그람양성이라고 하고, 두번째 염색색소로 염색되는 것을 그람음성이라 한다. 그람양성균(포도상구균, 폐렴연쇄균, 연쇄구균, 결핵균 등)은 짙은 자색으로 물드는 한편, 음성균(대장균, 이질균, 스피로헤타 등)은 두번째 염색액의 색을 나타내기 때문에 세균 감별에 사용된다. 이 염색분리의 기구는 오랫동안 밝혀지지 않았지만, 현재는 그람양성균의 세포벽은 색소-I2복합체를 통과시키지 않고, 탈색조작에서 색소를 용출시키지 않기 때문인 것으로 추측한다.

참고 자료

강옥주 외 3인 / Food Microbiology / 수학사 / 2011
Campbell / Biology 8th ed / Pearson / 2008
www.doopedia.co.kr 두산백과 순수과학-생물학

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