[실험계획서] Yeast Invertase 분리정제와 면역반응을 통한 분석protocol

목차

1. Schedule
2. 면역실험
3. Invertase
4. Yeast에서 invertase 추출
5. 효모 추출액으로 invertase 정제
6. 이온 교환 크로마토그래피에 의한 분리
7. BCA Assay (단백질 정량)
8. BCA 실험 방법
9. 효소 활성 측정
10. 효소 활성 측정 실험
11. SDS-PAGE
12. Western Blot
13. 사용하는 항체의 종류와 원리
14. HPLC를 이용한 Invertase 순도 분석
15. Normal Phase / Reverse Phase
16. Gel Filtration
17. 실험 방법
18. CE(Capillary Electrophoresis)
19. CE 장비 모식도
20. CE 실험 방법
21. 예상 실험 결과
22. ELISA
23. Indirect ELISA methods
24. Indirect ELISA 시약 구성
25. 유세포 분석기 정의 및 목적
26. 전기영동용 Protein Marker

본문내용

Invertase
효모나 고등 동물의 창자액 속에 있는 효소이다.
Invertase는 Sucrose의 과당을 인식하여 가수 분해한다. Sucrase는 glucose쪽으로부터 분해한다. 따라서 양자는 sucrose를 분해하지만 다른 효소로서 인식되어 있다.
▶ 수크로스 : 포도당과 과당의 중합분자 = 설탕
▶ 환원당 : 모든 단당류 (glucose, fructose, galactose etc.)

Yeast에서 invertase 추출
시중 제빵용 과립형 yeast 준비
현탁액 만듦
Ultrasonication 초음파처리 yeast파쇄함
Tube를 얼음에 꽂아 온도에 의한 변성 방지
후에 정제된 invertase로 면역과 기타 분석에 쓰일 것을 대비하여 충분한 양을 준비한다.

<중 략>

실험 방법
1) 컴퓨터와 HPLC의 전원을 켠다. (사용하는 Coulomb : 4.6 × 150mm C18 5μm column)
2) Autochro 프로그램을 실행시킨다.
3) Acetonitrile과 water의 6:4 혼합 이동상을 0.2mL/min씩 올리면서 1.8mL/min으로 만들어 준다. 이때 flow rate를 올린 후 압력이 안정화 되는 것을 확인한다.
4) 1.8mL/min에서 40분 정도 이동상을 흘려보내 장비 안에 남아있을 수 있는 불순물 및 bubble을 제거한다.
5) 분석하고자 하는 시료(Benzene, Toluene, p-Xylene)의 표준용액을 적어도 3가지 이 상 만든다. (ex. 200ppm, 400ppm, 600ppm)
6) 측정하고자 하는 sample을 injection하기 전에 flow line에 Bubble을 확인한 후 injection한다. (Dead time 측정 : Acetone을 이동상에 희석하여 측정한다.)
7) Data를 수집해서 결과를 얻는다.
8) Flow rate를 처음과 반대로 단계적으로 0까지 내린 다음 HPLC와 컴퓨터의 전원을 끈다.

참고자료

· 없음