[생화학실험]Peptide Mass Fingerprinting Ⅱ MALDI-TOF

소개

MALDI-TOF의 원리와 사용법을 익히고 이해하고, peptide sample을 분석해보는 레포트입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 문헌

본문내용

1.1. Mass spectrometry
질량분석기는 질량과 전하의 비율을 측정함으로써 분자의 질량을 측정한다. 질량분석기에 의한 분자량 측정은 분자이온의 생산, 분리, 그리고 탐지에 기본을 둔다. 질량분석기를 이용한 측정은 이온화된 분석물질의 가스상태에서 수행된다. 질량분석기는 ion source, mass analyzer, detector로 구성된다. Ion source에서는 sample을 이온화시키는데, ESI(Electrospraty ionization)와 MALDI가 일반적으로 사용된다. ESI는 용액으로부터 분석물질을 이온화시키고 용액을 바탕으로 하는 분리도구에 쉽게 연결된다. MALDI-TOF는 laser 진동을 통해 크리스탈화된 matrix 샘플을 승화시키고 이온화한다. Analyzer에서는 m/z 비율에 따라 ion을 분리한다. 분석 타입에는 ion trap, time-of-flight, quadrupole, FT-MS 분석기 등이 있다. Detector에서는 현재 이온을 모니터링하고, 그것을 증폭시킨다. 그리고 그 signal은 mass spectrum 형식으로 기록되는 데이터 시스템에 전송된다. 이온들의 m/z 값은 샘플내의 수많은 구성성분들과 각각의 구성성분의 분자량과, 그리고 샘플 내에 다양한 구성성분의 상대적 존재도를 보여주기 위한 강도들로 구성된다. 일반적인 것들로는 광전자 photomultiplier, electron multiplier 그리고 micro-channel plate detector이다.

<중 략>

마지막으로 matrix solution으로 MALDI plate에 standard와 함게 elution시켜 말리면 plate위에서 crystal을 형성하게 된다. 이 단계까지 마치면 MALDI-TOF를 측정할 준비가 된 것이다. MAL야 plate에 loading 할 때 신경써야 할 점은 standard와 sample loading을 인접한 곳에 한다는 것이다. 이것은 plate의 미세한 휘어짐으로 인하여 발생할 수 있는 오차를 줄이기 위함이다. Matrix solution으로는 50% ACN을 이용하였다. MALDI-TOF 기기의 사용법은 의외로 간단했다.

참고자료

· Maldi-Tof Mass Spectrometry of Synthetic Polymers, Harald Pasch, Wolfgang Schrepp
· Lehininger biochemistry 5th, p.90∼100