생물화학공학실험 Miniprep

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion

본문내용

1. Abstract
Miniprep 실험은 미생물의 세포벽과 세포막을 부수고 plasmid DNA를 분리하는 것이목적이다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 분리하는 것이다. chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear 형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있다.

<중 략>

(2) 실험방법
➀ 미리 배양한 세포와 2ml 튜브를 준비한다.
➁ 미리 배양한 세포 1.9ml을 2ml 튜브에 넣는다.
➂ 13,000rpm으로 10분 원심분리 한 뒤 상등액을 버린 후 남은 용액은 피펫으로 제거한 다.
➃ Cell이 들어있는 2ml 튜브에 S1 250μl 넣고 vortexing한다.
➄ S2를 250μl씩 넣고 inverting을 한다.
➅ S3를 350μl씩 넣고 2~3회 inverting을 한다.
➆ 13,000rpm으로 10분 원심분리하고 plasmid purification tube를 준비한다.
➇ plasmid purification tube에 상등액을 붓는다.

<중 략>

4. Discussion
이번 실험의 목적은 Alkaline lysis를 사용하여 미생물에서 plasmid DNA를 분리해 내는 것이다. 실험에서 사용되는 시약을 자세하게 고찰해보면, S1에 포함된 EDTA는 새포벽을 유지하는데 필수적인 칼슘 이온을 제거하여 세포벽이 무너지게 한다. S2에 포함된 SDS는 ionic detergent로 세포막을 깨는 일을 하며, S3는 chromosomal DNA를 엉기게 하는 역할을 한다. 또한, PW는 가라앉은 단백질들을 제거하기 위해서 사용되며, 마지막으로 EB는 DNA를 걸러내는 역할을 한다.

참고자료

· 없음