4조 Agarose Gel Eelctrophoresis (2)

소개

예비레폿

목차

1. 실험 목표
2. 실험 이론
3. 기구 및 시약
4. 실험 방법

본문내용

1. 실험 목표

한천 gel을 사용하여 직류 정전압 전류를
통함으로써 하전된 목적물질을 분리해본다.

2. 실험 이론
(1) 전기영동법의 원리
① 전기영동은 전기장 안에서 하전된 입자가 양극 또는 음극으로 이동하는 현상.
② 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기, 지지체의 종류 등 여러 가지 요인에 의해 결정. 즉, 분자 자체의 성질에 따라서 결정된다.
③ 전기영동법은 아미노산, 뉴클레오티드, 단백질들과 같은 하전된 물질들을 분리하거나 분석하는데 매우 효과적인 수단으로 이용.

<중 략>

⑤ EtBr용액 (Ethidium bromide)
얇은 판 모양으로 DNA가 이중 나선을 이루었을 때
나타나는 하나의 밴드와 비슷하다.(A-T 또는 G-C가
결합한 모양)
UV에 노출되면 형광색으로 발광한다.
DNA와 매우 친화력이 커서 마치 하나의 염기서열인
것 처럼 염기서열 사이사이에 껴 있으려 한다. 그렇게
되면 세포가 분열 시에 그 EtBr은 일종의 flame shift
mutation이 일어나 암이된다.
→ 발암 물질로 위험하지만 가장 빈번히 사용되고 있다.

⑥ 1% agarose gel 제조하기
1g의 agarose를 100ml의 1x TAE buffer에 넣은 다음 전자레인지에서 agarose가 완전히 녹을 때까지 끓인 다.
10mg/ml EtBr용액을 3㎕ 첨가한다.
60℃ 정도로 식혀준 후 comb을 꽂아 놓은 전기영동장치에 용액을 부어 gel을 굳힌다.

참고자료

· 없음