[생물학 실험 레포트] 세포 배양용 배지 제조 및 세포 계대 배양

소개

세포 배양용 배지 제조 및 세포 계대 배양에 대한 생물학 실험 레포트입니다.

목차

1. 실험목적

2. 실험재료

3. 실험방법

4. 실험결과

5. 고찰

본문내용

1. 실험목적
: 동물 세포배양용 배지의 제조법을 익히고, 세포 계대 배양을 통해 세포 배양의 전반적인 기술을 익힌다.

2. 실험재료
: NIH-3T3 cell-line, DEME(Dulbecco`s modification of Eagle`s medium) media, FBS, penicillin/streptomycin(항생제), PBS, Trypsin-EDTA, Pipette, serological pipette, 50ml tube, bottle top filter, cell culture dish(100Φ)

3. 실험방법
1) 배지제조
① FBS와 antibiotics를 waterbath에서 해동시킨다
→냉동보관 되어있던 FBS와 antibiotics를 36.5℃로 해동시킴으로써 인큐베이터에서 36.5℃의 환경에서 보관되던 세포에 배지를 넣었을 때 열에 의한 쇼크를 받지 않도록 한다.
②미리 멸균된 1L bottle에 serological pipette과 pipette을 사용하여 DEME 450ml, FBS 50ml, antiboitics 5ml을 넣고, 교반기를 이용하여 섞어준다.
→FBS는 배지의 10% antibiotics는 배지의 1%가 되도록 넣어준 뒤에 magnetic bar를 넣어 회전력을 이용하여 섞어준다.
③500ml bottle에 bottle top filter를 설치하고 suction 호스에 연결한다.
④ ②의 섞여진media를 bottle top filter에 천천히 넣어준다.
→이 과정을 통해 suction 호스를 이용하여 bottle top filter에서 걸러진 물질들을 흡수함으로써 ②에서 만든 배지를 filtering 해준다.

2)계대배양
①준비된 NIH-3T3 cell culture dish를 PBS로 washing한다.
→배지에 들어있는 FBS는 실험2)의 ②의 과정에서 세포를 culture dish로부터 떼어내는데 사용되는 Trypsin의 활성을 억제하기 때문에 washing하여 FBS를 제거해준다. PBS는 세포와 농도가 같은 bugger로 세포가 그 안에 들어가더라도 등장액이어서 손상을 받지 않아 세포를 washing하는데 사용된다. 초기에 culture dish에 들어있던 배지를 suction호스에 pasteur pipette을 연결하여 suction을해준 뒤에 PBS를 넣고 washing을 한 뒤 한번 더 suction하여 PBS를 제거해준다.

참고자료

· 없음