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생물학적내독소시험 (Limulus amoebocyte lysate assay)

내독소는 세포배양이나 유전공학과 관련된 회사나 개인에게 문제가 되고 있다. 내독소를 제거하거나 확인하기 위해 민감도가 높은 실험 방법들이 개발되었다. 이러한 실험 방법들의 절차는 내독소의 양을 추적하기 위해 상당히 민감도가 높아야 한다. 대부분 의약, 제약 회사는 내독소의 단위(E.U.)를 0.25(0.025 ng/ml)로 제한하여 설정하고 있다. 내독소를 최대한 정확하게 측정하는 방법 중 하나가 바로 Limulus amoebocyte lysate (LAL)이다. 이 방법은 내독소가 젤-혈전 형태로 순환하는 Limulus의 변형세포로부터 나온 혈전 단백질과 접촉할 때 관찰을 기반으로 둔다. 이 분석의 키트는 오늘날 칼슘, Proclotting 효소, procoagulogen을 포함하여 이용한다. 여기서 proclotting 효소는 응고효소 활성화 시키는데 박테리아의 내독소와 칼슘에 의해 활성화 시킬 수 있다. 활성화된 응고 효소는 폴리펩티드 서브유닛에 procoagulogen의 클레베지를 촉진시킨다. 그 서브유닛은 gel-clot을 형성하기 위한 이화항결합에 의해 같이 참여하게 된다. 이때 분광광도법은 용해물인 단백질 침전물을 측정하는데에 사용된다. 이 LAL 방법은 ng 단위 수준에서 측정하기 때문에 식품이나 의약 산업에서는 내독소의 참조표준에 맞춰 반드시 표준화 시켜야 한다.

참고자료

· Chris Bell 외 2명. 2003. Food Microbiology and Laboratory Practice. Blackwell Science, p.576.