Observation of Microorganism using Gram`s Stain Method(그람염색법)

소개

생명과학실험 예비레포트,
Observation of Microorganism using Gram`s Stain Method
고체배지에서 배양한 미생물을 그람염색하여 관찰

목차

1. 실험 목적
2. 실험 원리
3. 그 외 보충자료
4. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
: 고체배지에서 배양한 미생물에 그람염색법을 이용하여 염색한 뒤 현미경으로 박테리 아를 관찰해보자.
2. 실험 원리
◈그람염색의 원리
그람염색은 세균이 가지는 세포벽이 특성에 의해 염색이 달리되는 성질을 이용한 것이다. Gram 요오드 용액은 매염제로 Crystal Violet과 함께 화학적 복합체 (CVI complex)를 형성한다. 매염제는 염료(Crystal Violet)에 의해 염색된 세포들에 대하여 친화력을 증진시킨다. 에탄올은 세균의 세포벽에 존재하는 지방질을 용해시켜 CVI 복합체를 떨어져 나가게 하는데 CVI 복합체가 남아있는 세균은 보라색을 띠게 된다. Safranin은 염색과정에서 형성된 CVI 복합체를 가지는 세포에서는 영향을 받지 않지만 탈색된 세포 즉 지방질이 있던 세포는 붉은색으로 염색된다. 즉 세포벽에 포함된 지방질의 함유 유무에 따라 염색이 달라지게 된다.
이 염색법은 기술이 미숙하면 잘못 판정하기 쉬우므로 숙련될때까지 많은 연습이 필요하다. 또 어린 배양균은 염색성이 좋으나 노쇠기 배양균은 염색성이 좋지 않아 그람양성균이 음성균 같이 보일 때가 많으므로 주의하여야 한다.
◈그람양성균과 그람음성균의 비교
그람염색은 세균학에서 가장 많이 사용되고 있는 방법이다.
그람양성균과 그람음성균을 구별하는 염색이기 때문에 Differential Stain 이라고도 한다. 1884년 C. Gram에 의해 처음 창안된 염색법으로 두가지의 세균으로 분류된다. 이후 여러 가지 방법이 제안되었으며, Hucker의 방법과 Burke의 방법이 일반적으로 사용된다. 그람염색결과 자주색으로 염색되는 세균은 그람양성이며 빨간색으로 염색되는 세균은 그람음성이다. 양성과 dmda성은 전기적 성질과는 무관하며 단순히 형태학적 차이를 나타내는 용어이다. 그람양성균과 음성균이 서로 다르게 염색되는 것은 근본적으로 세포벽 구조가 다르기 때문이다. 세균의 세포벽은 크기와 형태를 유지하게 하며 또한 삼투압에 의한 세포파열을 방지하는 역할도 한다.
세포벽에는 펩티도글리칸이라고 하는 물질이 있기 때문에 아주 단단하다. 그람양성균의 세포벽은 여러 층의 펩티도글리칸 층이 두껍게 감싸고 있는데 세포벽의 약 80~90%가 펩티도글리칸이다. 반면, 그람음성균의 세포벽은 펩티도글리칸 층이 한 겹으로 매유 얇으며 이층 외부에는 인지질, 리포폴리사카라이드, 리포프로테인 등으로 구성된 외막이 감싸고 있으며. 세포벽의 10~20%만이 펩티도글리칸이다. 이러한 세포벽 구조의 차이로 인해 그람염색법이 세균을 분류하는 가장 기본적인 기준이 되었다.

참고자료

· 킴볼 생물학 -Kimball <대학생물교 | 탐구당 | 1999년 01월 31일>