RFLP방법을 이용한 ADH(H47R)와 ALDH2(E487K)의 유전자형 분석 & Sequencing 방법을 이용한 ADH, ALDH2 Polymorphism 발굴

소개

ADH(H47R)와 ALDH2(E487K)의 유전자형을 RFLP 방법으로 결정하여 genotyping 방법을 이해하고 ADH(H47R)와 ALDH2(E487K)을 포함한 500bp 영역을 sequencing하여 염기순서를 해석하는 방법을 이해하는 실험보고서

목차

Abstract
Introduction
Materials & Methods
Result
Discussion
Reference

본문내용

이번 실험은 ADH(H47R)와 ALDH2(E487K)의 유전자형을 RFLP 방법으로 결정하여 genotyping 방법을 이해하고 ADH(H47R)와 ALDH2(E487K)을 포함한 500bp 영역을 sequencing하여 염기순서를 해석하는 방법을 이해하는 실험이었다. ADH1B는 alcohol을 acetaldehyde로 바꾸고 acetaldehyde는 다시 ALDH2에 의해 acetate로 전환시키는데 두 gene은 개개인의 유전적 특성을 나타내는 SNP에 의해 다른 amino acid를 만들게 된다. ADH1B gene의 47번째 amino acid가 histidine인 사람은 arginine인 사람보다 alcohol을 acetaldehyde로 빠르게 분해하며 ALDH2 gene의 487번째 amino acid가 glutamine인 사람은 lysine인 사람보다 acetaldehyde가 acetate로 빠르게 분해한다. 이를 확인하기 위해 touchdown PCR 후 restriction enzyme(MboⅡ)처리하여 electrophoresis하는 RFLP 방법과 DNA baser를 이용하여 개개인의 polymorphism을 발굴하는 실험을 실행하였다. RFLP에서 touchdown PCR로 실험을 수행하는 이유는 Tm(melting temperature)을 알기 위한 touchdown PCR의 특성을 고려해 보았을 때 두 primer의 Tm값이 차이가 많이 나서 touchdown PCR을 했으리라 추측해 보았다. 결과는 RFLP방법에서 125bp와 10bp의 두 개의 band를 가지는 결과를 확인하였으며 이로써 실험결과가 ALDH2 gene의 487번째 amino acid가 glutamine임을 알 수 있었다. 전체적으로 band들이 흐릿하게 나온 것은 사용해준 DNA농도가 필요한 양보다 충분치 않아서 인 것으로 추정된다. DNA baser를 통해서 ADH1B gene의 47번째 amino acid가 histidine이 나왔으며 깨끗한 하나의 peak가 관찰되는 것으로 보아 major type의 homozygous인 것을 알 수 있었다. ALDH2의 결과도 ALDH2 gene의 487번째 amino acid가 glutamine으로 peak 역시 깨끗한 하나의 peak가 관찰되는 것으로 보아 major type의 homozygous인 것을 알 수 있었다.

참고자료

· 백용균, 한국내 알콜중독군과 정상인간 ADH2 및 ALDH2 유전적 변이의 차이, 한국유전학회, 2000, pp.236~239
· 김인규, 한국인 집단의 ADH2 및 ALDH2 유전적 다형현상, 한국유전학회, 1999, pp.138~141