일반생물학_생물실험보고서_제한효소를이용한_플라스미드디엔에이_절단확인

소개

일반생물학실험 실험보고서입니다.

목차

1)실험 목적
2)실험 원리:
3)실험 방법:
4)결과:

본문내용

2)실험 원리:
•Agarose gel Electrophoresis 원리
Agarose gel Electrophoresis는 DNA 조각을 분리하고 인식하는데 사용하는 가장 일반적인 방법이다. 이 기술은 간단하고 빠르며 다른 방식으로는 잘 안되는 DNA 용해도 가능하다.gel 안의 DNA 위치는 저밀도의 형광물질 EtBr을 착색시킴으로써 결정될 수 있다. 1～10 ng 의 DNA도 이 자외선을 이용하여 감지할 수 있다. 원한다면 이 gel 안에서 나타나는 DNA 밴드들을 다양한 유전자 복제 목적에도 이용할 수 있다. Agarose gel은 강력한 분리능력을 지니고 있다. 겔 전기영동은 젤리같은 물질로 얇게 만든 판형물인 겔을 체처럼 사용하여 단백질이나 핵산과 같은 거대분자를 크기나 전기적 전하에 의해 물리적으로 분리하는 방법이다. 납작한 직사각형 모양의 겔 한 끝에 DNA가 들어가는 홈을 만들고 그 홈에 각 시료를 넣는다. 이어 DNA시료를 넣어준 부분의 겔 쪽에 음극을 연결하고 반대편 끝에 양극을 연결한 후 전류를 걸어주면 DNA는 인산기를 갖고 있어서 전기적으로 음성을 띠므로 양극으로 이동한다. DNA가 이동함에 따라 겔을 구성하고 있는 다당체의 복잡한 망구조로 인해 길이가 긴 DNA 조각이 작은 조각보다 천천히 이동하므로 DNA가 길이에 따라 분리된다. 따라서 겔 전기영동에 의해 DNA 분자 혼합물이 띠 형태로 나타나며 각 띠는 일정 크기의 DNA분자이고 길이가 작은 분자일수록 겔의 바닥쪽에 위치한다. 원하는 절편(크기나 서열을 가진)만을 가진 gel 부위를 gel 덩어리로 잘라내고, 그 다음에 순수한 DNA 절편은 확산에 의해 gel로부터 작은 용적의 물로 추출할 수 있다. 1% agarose를 만들어서 실험한다. agarose 가루 넣고 TAE버퍼 녹이면 굳어지는데 이것에 홈을 만들고 굳힌다.
전기영동은 다음의 두가지 형태의 정보를 제공한다.
◦절편의크기: 분자량이 알려진 DNA 절편은 가끔 크기의 기준을 제공하기 위하여 시료 다음에 있는 골에 넣을 수 있다.
◦특이한 DNA 서열의 존재: 특수한 DNA서열의 위치를 probe를 사용하여 결정할 수 있다. DNA가 아직 gel에 있는 동안 변성시키고, 그 겔을 나일론 막에 부착시켜 blot을 만든다. 그 다음에 찾고 있는 절편에 상보적인 서열을 가진 단일사슬 DNA probe에 막을 노출시킨다. 만약 관심있는 절편이 존재하면 절편은 probe와 혼성화가 된다.

참고자료

· 닐 켐벨, 생명 과학 5판, 바이오 사이언스, 2007
· purves, 생명 생물의 과학 7판, 교보문고 , 2007
· LODISH, 분자세포 생물학 5판, 월드사이언스, 2006
· walter, 필수세포생물학 2판, 교보문고