Restriction Enzyme Reaction

소개

Restriction Enzyme Reaction에관한 예비보고서 입니다.

제 인맥을 동원해서 5개의 예비보고서를 합쳐서 올립니다..

혼합해서 쓰시거나 단독적으로 쓰시면 매우 효과적일듯 싶네요^^

목차

Restriction Enzyme Reaction
1. 실험목적
2. 이론
3. 실험방법

[실험목적]
[이론적 배경]
[실험물질]
[실험방법]

실험목적
이론

1. 실험 목적
2. 이론적 배경
2-1. 플라스미드
2-2. restriction enzyme
2-3. Agarose Gel Electrophoresis

3. 실험 재료 및 방법
3-1. 실험 재료
3-2. 실험 방법
3-3. 실험시 주의 사항

본문내용

3. 실험방법
※Materials
1. Vector
pT7 vectors with 500bp length gene that has NdeⅠ/XhoⅠ enzyme recognition sites and 300bp gene that has XhoⅠ/HindⅢ sites.
2. TAE buffer
Tris-acetate (TAE) 50x
242g tris base
57.1ml glacial acetic acid
100ml 0.5M EDTA (pH 8.0)

3. 1% Agarose gel preparation
1) Casting tray를 씻고 잘 말린다.
2) Agarose를 1x TBE를 혼합한다.
3) Microwaving 이나 stirring in a hot plate를 통해 용해시킨다.
4) Casting tray에 용해된 아가로즈를 붓는다. 그리고 선반에 고정시키면서 casting위에 comb를 놓는다.
5) 딱딱해지도록 놓아둔다. - 30분에서 1시간
6) Comb을 제거하고 horizontal gel apparatus를 놓은 다음 1x TBE로 덮는다.
7) Load samples and run at constant voltage.

4. Other Equipments
-horizontal gel apparatus
-tape for ends of casting try
-electrophoresis power source and leads
-ethidium bromide 10mg/ml

※Experimental Procedure
1. 제한효소반응
1) Based on the measured DNA-concentration, pippet 10마이크로리터 of each DNA
sample.
2) Mix DNA samples with 0.5마이크로리터 of each enzyme and appropriate 10x restrictiom enzyme reaction buffers. 1ul of many enzyme preparations is sufficient to digest 10마이크로그램 of DNA in an hour.
3) Incubate for 1 to 2 hr at 37C for that enzyme reaction.

2.Agarose Gel Electrophoresis
1) 작동하기 위해서 comb을 조심히 제거한 후, electrophoresis chamber에 tray를 위치하 고, electrophoresis buffer 로 덮는다.
2) 전기영동의 샘플을 준비하기위해서, 9마이크로리터의 DNA용액에 염색되어진 1 마이크로리터의 10X 젤을 추가한다. 잘 섞는다.
3) Dye marker가 적절한 거리만큼 이동할 때까지 50-150볼트로 전기영동한다.
4) 만약 젤이 영동할 동안 ethidium에 착색되지 않으면, 젤을 0.5마이크로그램/ml의 ethidium bromide에 염색시킨다.
5) UV light 아래에 염색된 젤을 놓으면 샘플 DNA가 보이게 될 것이다.

참고자료

· 없음