생화학 레폿 - SDS PAGE

소개

생화학 실험 레포트로 SDS PAGE에 관한 인트로 입니다.

목차

1 chromatography : β-galactosidase 정제
1.1 ion-chromatography
1.2 DEAE-cellulose chromatography
1.3 Enzyme assay

2. β-galactosidase activity
2.1 Z buffer
2.1.1 Sodium phosphate
2.1.1.1 제일인산나트륨
2.1.1.2 제이인산나트륨
2.1.1.3 제삼인산나트륨
2.1.2 KCl
2.1.3 MgSO₄
2.1.4 2-Mercaptoethanol (also β-mercaptoethanol)
2.2 SDS-PAGE
2.3 Tri buffer : teis(hydroxymethly) aminomethane (pKa=8.3)
2.4 APS(ammonium persulfate)

본문내용

Ⅰ. Introduction

1 chromatography : β-galactosidase 정제

1.1 ion-chromatography
이온 크로마토그래피는 이온-교환 크로마토그래피의 성능을 높인 방법이여, 음이온 분석에 선택적 방법이 되었다. 이온 크로마토그래피는 반도체 산업에서 탈염수 내에 존재하는 0.1ppb 수준의 음이온과 양이온을 조사하기 위해 사용된다.
이온 크로마토그래피에서 음이온은 이온교화에 의해서 분리되고, 전기전도도를 이용하여 검출된다. 용리액에 포함된 전해질의 전도도는 비교적 높아서, 분석 대상 이온이 용리될 때 나타나는 전도도 변화보다 크며, 따라서 시료는 검출되지 않는다.
KNO₃ 및 CaSO₄를 함유한 시료를 분리칼럼에 주입해 Na₂CO₃로 용리하였다. NO₃ˉ 와 SO₄²ˉ 수지와 평형을 이루고, CO₃²⁻용리에 의해 서서히 대치된다. 일정한 시간이 지난 후에 Na₂CO₃와 Na₂SO₄는 첫 번째 칼럼으로부터 용리된다. 용매는 고농도의 Na₂CO₃를 함유하고 그 높은 전도도는 분석성분 화학종의 전도도 혼돈되므로 이들 화학종은 쉽게 검출되지 않는다.

그 다음에 용액은 H⁺형의 양이온 교환체인 억압칼럼 을 통과한다. 모든 음이온 은 그냥 씻겨서 통과되고 양이온은 H⁺이온으로 대치 된다. 용출액은 HNO₃, H ₂SO₄, H₂CO₃를 함유 한다. 질산과 황산은 높은 전도도를 가진 강전해질이 지만 탄산은 매우 약하게 해리되며 전도도에 기여하 는 것도 작다. 여기서 분석 성분인 음이온들은 쉽게 검출될 수 있다.
양이온 크로마토그래피에 대한 비슷한 조직을 보여주고 있다. 동일한 시료를 H⁺형 양이온 교환 칼럼에 주입하여 HCl로 용리하였다. 양이온 K⁺및 Ca²⁺은 HCl의 센 바탕으로 된 분리컬럼 출구에 도달한다. 억압칼럼 HCl을 중화시키는 OH⁻을 함유하며, 양이온들은 그 hydroxide로서 용리된다. 불용성 hydroxide로서 형성하는 양이온들은 검출할 수 없기 때문에 이 기술은 음이온 크로마토그래피보다 더 제한을 받는다.

참고자료

· 없음