거대세포바이러스 조기항원 단백질에 대한 단세포군 항체 제조에 관한 연구 (Development of Monoclonal Antibody to Cytomegalovirus Major Immediate-early(α) Protein)

서지정보

· 발행기관 : 대한소아감염학회
· 수록지 정보 : Pediatric Infection and Vaccine / 6권 / 2호 / 253 ~ 260페이지
· 저자명 : 박지호, 손영모, 박규현, 이원영

초록

목적 : human CMV가 생성하는 분자량 72,000 dalton의 immediate early protein(p72)과

반응하는 단세포군 항체를 국내에서 분리된 CMV 야생주로 직접 제작하여 진단에 사용해

보기 위한 것이다.

방법 : 정상 인체 섬유아세포(Foreskin 유래)를 10% 우태아혈청이 함유된 Eagle's

minimal essential medium(MEM)에서 배양하여 사용하였으며 마우스 골수종서1포는 P3X63

Ag8.653(ATCC, Maryland USA)을 5×10⁵/m1 세포수를 유지하도록 배양하였

다. 사용된 항원은 선천성 CMV 감염아의 소변으로부터 검출한 CMV(KJHJ90)를 대량 증식

시켜 사용하였다. 생후 6∼8주된 Balb/c마우스의 복강내에 CMV 항원을 1주일 간격으로 4

회 주사한 후 면역시킨 마우스 비장에서 얻은 임파구와 형질세포 종세포로 최적발육기의

P3X63-Ag8.653을 사용하여 융합하였다. 융합세포를 배양한 후 간접면역형광항체법을 이용

하여 항체가가 높은 것을 골랐다.

결과 : 생산된 28종의 단세포군항체 중 그림1과 같이 LPC12와 LPC23클론이 AD169에 감

염된 세포의 핵에 특히 강하게 반응하였다. 정제된 AD169를 SDS-PAGE한 후 Western

blotting을 하여 생산된 단세포군항체가 반응하는 항원의 분자량을 확인하였으며 그 중

LPC12와 LPC23클론에서 생성된 단세포군항체는 약 72KDA의 항원과 특이적으로 가장 강

하게 반응하였다.

결론 : 본 연구에서 제작된 LPC12와 LPC23 클론에서 생성된 단세포군 항체를 이용하여

선천성 CMV감염으로 확인된 소아의 소변을 이용하여 CMV AD 169주 유래 항체(P63-27)

과 비교한 DEAFF 검사상 동일한 결과를 확인한 바 LPC12와 LPC23 클론 항체는 AD

169(P63-27)과 같이 CMV 감염의 조기진단에 사용할 수 있을 것으로 사료된다.

영어초록

Purpose : The purpose of this study is to make and use monoclonal Ab which reacts
with CMV major immediate early( α ) protein(p72).
Methods : Normal human fibroblast(Foreskin derived) was cultured in Eagle's minimal
essential medium(MEM) containing 10% cowfetus serum and mouse chondroblast was
cultured in P3X63 Ag8.653(ATCC, Maryland USA) to maintain 5×10⁵/m1
cell counts. CMV(KJHJ90) from congenital CMV infected infant's urine was multiplied
and used for Ab making. CMV Ag was injected 4 times, 1 week interval into the
peritoneal space of 6∼8 weeks old mice. And then lymphocytes and fibroblasts taken
from spleen were obtained and conjugated. After the conjugated cell cultured, we chose
the cell that had high Ab titer using indirect immunofluerescent method.
Results : Among the 28 monoclonal antibodies obtained LPC12 and LPC23 reacted
highly with nucleus of AD169 infected cell. Purified AD169 after SDS-PAGE, molecular
weight of Ag, which reacted with purified monoclonal Ab, was obtained using Western
blotting. Monoclonal Ab of LPC12 and LPC23 clone reacted most highly with 72 kd Ag.
Conclusion : LPC12 and LPC23 clonal Ab with AD 169(P63-27) is useful on early
diagnosis of CMV infection.

참고자료

· 없음