한국산 주걱송편버섯SCH-3로부터 정제 된 Laccase의 특성

서지정보

· 발행기관 : 한국균학회
· 수록지 정보 : 한국균학회지 / 31권 / 2호 / 59 ~ 66페이지
· 저자명 : 박은혜, 윤경하

초록

한국산 주걱송편버섯(Pycnoporus cinnabarinus) SCH-3로부터 배지 내로 분비된 laccase를 ultrafiltration과 anion exchange chromatography, adsorption chromatography 를 이용하여 분리·정제하고 정제된 효소의 특성을 조사하였다.
Laccase는 균주의 일차 대사 과정에서 주로 생산되는 세포외 페놀 산화효소였다. 주걱송편버섯을 기본 배지에서 배양하였을 때 생장은 배양 9일에 최대였고, laccase의 활성은 배양 7일에 최대활성을 나타냈으며 배양액에서 LiP, MnP 그리고 AAO의 활성은 측정되지 않았다.
Laccase의 생산에 미치는 유도원의 영향을 조사하기 위하여 배양 중인 주걱 송편버섯에 몇몇 유도원을 첨가한 결과, 2,5-xylidine은 대조구에 비하여 laccase의 생산을 25배 증가 시켰다. 정제된 laccase는 SDS 젤 전기영동 에서 대략 66 kDa의 분자량을 가지는 단일 폴리펩타이 드(single polypeptide)였고, 탄수화물 함량은 9%였다. ABTS[2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)]를 기질로 사용하며 정제된 laccase의 Km과 Vmax를 조사한 결과 각각 44.4 mM과 56.0 mmole·min-1·mg-1 로 측정되었다. Laccase 활성의 최적 pH는 3.0이며, 이 효소는 60oC에서 1시간 동안 처리하였을 때 매우 안정적이었고 80oC에서 10분간 처리하였을 때 효소의 활성이 반감되었다. Laccase의 분광학적 특성을 조사한 결과 구리를 포함하는 단백질로 나타났다. 일반적으로 알려진 laccase의 기질들에 대한 특이성을 조사한 결과 5 mM ABTS와 5 mM hydroquinone에서 높은 활성을 나타내었으며 tyrosine에서는 laccase의 활성이 나타나지 않았다. 저해제의 영향을 조사한 결과, 일반적으로 구리를 포함하는 단백질의 저해제인 NaN3, TGA, DDC를 일정농도로 처리한 실험구에서는 효소의 활성이 완전하게 억제되었으며, r-coumaric acid와 EDTA 처리구에서는 효소의 활성이 억제되지 않았다. 한국산 주걱송편버섯 SCH-3 균주로부터 생산되는 laccase의 N-말단의 아미노산의 서열은 P. coccineus의 laccase와 호주에서 분리·동정된 P. cinnabarinus PB의 laccase와 94%가 같았다.

참고자료

· 없음