일반생물학1 4차 풀레 Plasmid DNA의 제한효소 절단 및 전기영동(100점)

소개

"일반생물학1 4차 풀레 Plasmid DNA의 제한효소 절단 및 전기영동(100점)"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Meterial & Method
4. Results
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract
본 실험은 제한효소가 절단한 plasmid DNA와 절단하지 않은 plasmid DNA의 크기를 전기영동을 통해 확인하는 것에 그 목적이 있다. Vector는 유전자를 조작하기 위한 DNA이며, 제한효소는 DNA의 특정 염기서열을 인식, 절단하는 효소이다. 본 실험에서는 plasmid vector(pUC4K)를 BamH I 제한효소를 통해 절단하였다. DNA는 음전하의 인산기로 인해 양극으로 이동하므로 분자를 크기, 전하량에 따라 분리하는 겔 전기영동으로 DNA를 분리하였다. 실험에서 사용한 agarose gel은 다공성 그물망 구조로 농도가 높을수록 촘촘해져 실험에서는 사용한 1% agarose gel 대신 0.8%, 5% agarose gel을 사용하면 더 큰, 작은 분자를 분리하는 데 유용하다. 실험에서는 Tris, Acetic acid, EDTA로 구성된 TAE buffer를 사용하고, DNA 위치 시각화를 위해 Redsafe를 gel에 넣어 UV를 조사해 DNA의 크기를 확인하였다. 실험 결과 pUC4K만 넣은 sample에서는 2000 bp ~ 3000 bp, 3000 bp ~ 8000 bp, 10000 bp 이상에서 band가 관찰되었고, BamH I를 같이 넣은 sample에서는 1000 bp ~ 1500 bp, 3000 bp 부근에서 두 band가 관찰되었다. 이는 3966 bp의 pUC4K가 BamH I에 의해 절단되어 1264 bp, 2702 bp의 DNA 절편이 되는 이론을 잘 반영한다. pUC4K만 넣은 sample에서 여러 band가 관찰된 이유는 DNA의 구조에 따라 gel에서의 이동속도가 다르기 때문이다. BamH I 대신 EcoR I를 처리하면 작은 절편은 더 적게, 큰 절편은 더 많이 이동한 band가 관찰되었을 것이다.

참고자료

· David L. Nelson(2023), 레닌저 생화학, 월드사이언스, 177-178p
· Geoffrey M. Cooper(2019), The cell, 월드사이언스, 122-123p
· Zhu, Y., Zhang, L., Ma, Y., Cheng, X., Li, M., & Zhang, Y. (2020). A single-molecule counting approach for convenient and ultrasensitive measurement of restriction digest efficiencies.